• Home
  • Kemi
  • Astronomien
  • Energi
  • Naturen
  • Biologi
  • Fysik
  • Elektronik
  •  science >> Vetenskap >  >> Biologi
    Vad är den mest logiska sekvensen av steg för splittring av utländsk DNA?

    Det var inte så länge sen att genteknik var science fiction-saker - att en organism växte med en andras egenskaper. Sedan 1970-talet har emellertid genetiska manipulationstekniker avancerat till den punkt där splitsning av främmande DNA i en organism är nästan rutinmässigt. Till exempel kan gener för skadedjursbeständighet spliceras i majs, gener för att göra humant insulin kan sättas i bakterier och gener för att efterlikna humankanker kan sättas in i laboratoriemus. Uppgifterna i proceduren är för komplexa för att beskrivas i en kort artikel med många alternativ vid varje steg, men den konceptuella översikten av stegets logiska sekvens är ganska enkel.

    Inkubera plasmid DNA och DNA av intresse med ett restriktionsenzym. Restriktionsenzymet kommer att detektera en specifik sekvens av DNA-baser och skära DNA-skilda från varandra vid den tiden. Restriktionsenzymer härrör från vissa bakteriers försvarsmekanism mot virus. De är molekyler som kommer att snappa DNA där de upptäcker ett givet mönster av baser.

    Inkubera den avskilda plasmiden och de genomiska DNA-fragmenten med DNA-ligas. Med de flesta restriktionsenzymerna kommer den cirkulära plasmiden och de genomiska DNA-fragmenten att ha komplementära "klibbiga ändar" som kommer att ta sig till varandra. DNA-ligas kommer sedan att klara limning av bitarna tillsammans. Resultatet är en massa cirkulära plasmider som innehåller delar av det genomiska DNA.

    Sätt plasmiderna i bakterier och odla bakterierna för att odla kolonier av organismer impregnerade med modifierat DNA. Om din plasmid har en antibiotikaresistent gen som värdens bakterier saknar kan du automatiskt skärpa efter framgångsrikt modifierade bakterier genom att odla bakterierna på antibiotikuminfunderat tillväxtmedium. Det finns flera metoder för att införa plasmiderna i bakterierna, till exempel genom att använda en micronedle, applicera ett elektriskt fält för att öppna upp små hål i bakteriens membran eller bara sätta bakterierna och plasmiderna ihop i samma lösning och låta bakterierna absorbera dem naturligt.

    Provceller från de olika kolonierna av modifierade bakterier. Tvätta de provtagna cellerna med en tvättmedelslösning för att bryta ner bakteriemembranen och extrahera DNA: t, värm det eller exponera det för natriumhydroxid för att separera trådarna. Detta exponerar DNA-basens sekvens för analys.

    Inkubera DNA med en fluorescerande sond. Skina ett ultraviolett ljus på det inkuberade DNA och observera för fluorescens. Sonden består av en kort sekvens av DNA som matchar det genomiska DNA som du har satt in. Där sonden matchar det DNA du letar efter kommer det att glöda när det lyser.

    Isolera bakterierna från kolonierna som innehåller genen du vill infoga. Duplicera ditt DNA genom att antingen låta bakteriekolonierna växa eller extrahera DNA som du gjorde tidigare och duplicera det i en polymeras kedjereaktionsmaskin.

    © Vetenskap https://sv.scienceaq.com