Kvantifiera ditt RNA-prov genom att mäta absorbansen av ultraviolett ljus (UV). En nano-droppspektrofotometer använder endast en eller två mikroliter av ditt prov, vilket du kan återställa. Andra spektrofotometrar kräver ett mycket större prov. Utrotningskoefficienten för nukleotider vid en UV-våglängd av 260 nm i en 1 cm ljusväg är 20. Baserat på denna extinktionskoefficient är absorbansen av 40 | ig /ml RNA under samma betingelser en. Med hjälp av denna information kan du beräkna koncentrationen av ditt RNA-prov.

Gör om möjligt ett utspädning av ditt prov. En standardutspädning för en mikrokvett är 1:40. Gör denna utspädning genom att tillsätta 2 μL RNA-prov till 78 μL sterilt vatten.

Följ protokollen från din spektrofotometer för att kalibrera maskinen med hjälp av ett ämne och bestäm sedan den optiska densiteten för ditt prov vid en UV-våglängd på 260 nm.

Multiplicera absorbansen av ditt prov med din utspädningsfaktor med 40 μg RNA /mL. Ekvationen skulle vara: "RNA-koncentration (μg /ml) = (OD260) x (utspädningsfaktor) x (40 μg RNA /ml) /(1 OD260 enhet)" (Hofstra.edu) Till exempel: Om du spädde ut ditt prov med 1:40 och din absorbansavläsning var 0,08, du skulle multiplicera 0,08 x 40 x 40 = 128 μg /ml = 0,13 μg /μL

Beräkna renheten av ditt prov genom att ta en annan absorbansavläsning vid 280 nm UV våglängd . Förhållandet OD 260 /OD 280 kommer att indikera om - och på vilken nivå - ditt prov är förorenat med protein eller fenol. Ett resultat av 1,8 till 2,0 indikerar kvalitet RNA.

Tips

Glöm inte att kalibrera din spektrofotometer. Att köra en snabb elektroforetisk gel bekräftar dina speciella resultat.

Varning

Antag inte att ditt prov är rent. Med tiden för ett OD260 /OD280-förhållande sparar du tid och pengar på vägen.