1. Celllys:
* Cellerna bryts öppna och släpper innehållet, inklusive DNA.
* Detta kan göras med olika metoder, till exempel:
* tvättmedel: Stör cellmembran och släpp innehållet.
* enzymer: Bryt ned proteiner, vilket möjliggör frisättning av DNA.
* Mekaniska metoder: Såsom sonikering eller pärlslagning, fysiskt störande celler.
2. Borttagning av cellulärt skräp:
* Efter celllysen innehåller lysatet en blandning av cellulära komponenter.
* För att isolera DNA måste andra komponenter som proteiner och lipider tas bort. Detta kan uppnås genom:
* centrifugering: Spinning lysatet vid höga hastigheter skiljer komponenter baserat på densitet. DNA är vanligtvis i supernatanten.
* matsmältning: Enzymer som proteinas K bryter ner proteiner.
* Salting-out: Tillsätt salt till lysatet, som fäller ut proteiner men lämnar DNA i lösning.
3. Utfällning av DNA:
* DNA utfälls sedan ur lösningen, vilket gör det synligt. Detta görs vanligtvis med etanol eller isopropanol .
* Dessa alkoholer är mindre polära än vatten, vilket får DNA att klumpas ihop och bilda en synlig fällning.
* Tillägget av salt kan ytterligare förbättra nederbörden genom att neutralisera de negativa laddningarna på DNA -molekylen.
4. Visualisering:
* Det utfällda DNA samlas sedan, vanligtvis genom att spoola det runt en glasstång eller använda en pipett.
* DNA visas som en vit, strängmassa Eftersom den är mycket lindad och sammanflätad.
Viktiga punkter:
* Processen för DNA -isolering och visualisering kan optimeras baserat på celltypen och den avsedda applikationen.
* Olika tekniker och reagens kan användas beroende på de specifika experimentella kraven.
* Visualisering kan också förbättras med färgningstekniker, såsom att använda ett färgämnet som etidiumbromid, som binder till DNA och gör det fluoresce under UV -ljus.
Genom att förstå processen för DNA -utfällning och visualisering kan du effektivt isolera och analysera DNA från olika källor.
