Material:
1. Avjoniserat vatten
2. Kaliumdivätefosfat (KH2PO4)
3. Natriumvätefosfat (Na2HPO4)
4. pH-mätare
5. Magnetisk omrörare eller omrörare
6. Måttkolv (t.ex. 1000 ml)
7. Graderad cylinder eller pipett
Reagenser:
1. 0,2 M kaliumdivätefosfat (KH2PO4) lösning:Lös 17,41 g KH2PO4 i 1000 ml avjoniserat vatten.
2. 0,2 M natriumvätefosfatlösning (Na2HPO4):Lös 28,48 g Na2HPO4 i 1000 ml avjoniserat vatten.
Procedur:
1. Beräkna volymerna av 0,2 M KH2PO4- och 0,2 M Na2HPO4-lösningar som behövs för att framställa 1000 ml 0,1 M fosfatbuffert vid pH 7,5. Använd Henderson-Hasselbalchs ekvation:
pH =pKa + log ([A-]/[HA])
där:
- pH är det önskade pH (7,5)
- pKa är dissociationskonstanten för fosforsyra (7.21)
- [A-] är koncentrationen av den konjugata basen (Na2HPO4)
- [HA] är koncentrationen av den svaga syran (KH2PO4)
Ordna om ekvationen och ersätta värdena:
log ([A-]/[HA]) =pH - pKa =7,5 - 7,21 =0,29
[A-]/[HA] =antilog (0,29) =1,959
Från den önskade buffertkoncentrationen (0,1 M) och det beräknade förhållandet ([A-]/[HA]), bestäm volymerna av 0,2 M KH2PO4- och 0,2 M Na2HPO4-lösningar:
V (KH2PO4) =[HA] / [Total koncentration] * Total volym
=0,1 M/(0,1 M + 0,1 M) * 1000 ml
=500 ml
V (Na2HPO4) =[A-] / [Total koncentration] * Total volym
=0,1 M/(0,1 M + 0,1 M) * 1000 ml
=500 ml
2. Överför 500 mL 0,2 M KH2PO4-lösning till en 1000 mL mätkolv.
3. Tillsätt 500 ml 0,2 M Na2HPO4-lösning till mätkolven.
4. Snurra försiktigt i kolven för att blanda lösningarna.
5. Kontrollera buffertens pH med en pH-mätare. Justera pH till 7,5 genom att tillsätta små volymer av antingen 0,2 M KH2PO4- eller 0,2 M Na2HPO4-lösningar efter behov.
6. Om det behövs, tillsätt avjoniserat vatten för att få buffertens slutvolym upp till 1000 ml.
7. Blanda bufferten noggrant med en magnetomrörare eller omrörarstav.
Din 0,1 M fosfatbuffert med pH 7,5 är nu redo att användas. Förvara bufferten vid lämplig temperatur för dina experimentella förhållanden.
