1. Kolesterolesterhydrolys:
- kolesterolesteras (CE) hydrolyserar kolesterolestrar i fritt kolesterol och fettsyror.
`` `
Kolesterolester + H2O → kolesterol + fettsyra
`` `
2. Kolesteroloxidation:
- kolesteroloxidas (chod) Oxiderar fritt kolesterol till kolest-4-en-3-on och väteperoxid (H2O2).
`` `
Kolesterol + o2 → kolest-4-en-3-one + H2O2
`` `
3. Peroxidasreaktion:
- peroxidas (POD) Katalyserar reaktionen mellan H2O2 och ett kromogent substrat, 4-aminofenazon (4-AP) i närvaro av en fenol, vanligtvis fenol 4-aminoantipyrin (PAP) . Detta resulterar i bildandet av ett färgat kinoneiminfärg.
`` `
H2O2 + 4-AP + PAP → Quinoneimine Dye + H2O
`` `
Nyckelpunkter:
* kopplade reaktioner: Reaktionerna är kopplade, vilket innebär att produkten av en reaktion fungerar som underlaget för nästa. Detta säkerställer att bildningen av den färgade produkten är direkt proportionell mot den initiala kolesterolkoncentrationen.
* spektrofotometrisk mätning: Intensiteten hos den färgade produkten mäts med användning av en spektrofotometer vid en specifik våglängd. Absorbansen är direkt proportionell mot kolesterolkoncentrationen.
* kalibrering: Metoden kräver en kalibreringskurva med kända kolesterolstandarder för att relatera absorbansavläsningarna till kolesterolkoncentrationer.
Fördelar med chod-pap-metoden:
* Hög känslighet och noggrannhet
* relativt enkel och snabb
* allmänt tillgängligt och standardiserat
Nackdelar med chod-pap-metoden:
* kan påverkas av lipemi (höga triglyceridnivåer) och hemolys
* Kräver specialiserade reagens och utrustning
Sammantaget är CHOD-PAP-metoden en pålitlig och exakt metod för att mäta kolesterolnivåer i blod. Det används ofta i kliniska laboratorier och anses vara guldstandarden för kolesterolbestämning.
