Beräkning av virustitrar är ett komplicerat sätt att säga att en forskare räknar antalet virus i ett visst prov. För att beräkna virustitrar infekterar forskare tallrikar med växande bakterier med viruslösningar i varierande koncentrationer och räknar ut antalet virus i den ursprungliga lösningen genom att räkna de bakterier som har dött på grund av virusinfektionen.

Serieutsläpp < Sätt på handskar, fyll i 10 odlingsrör med 9 ml buljong och märk dem "10 ^ -1," "10 ^ -2", "10 ^ -3" och så vidare tills "10 ^ - 10. "Dessa rör kommer att användas för virala seriella utspädningar. Eftersom virus kan växa till oerhört höga koncentrationer, måste du späda dem för att räkna dem effektivt. Varje rör representerar en tio gånger utspädning av viruset.

Ta 1 ml av viruskulturen som du vill titera och överför den till röret med titeln "10 ^ -1" med en pipett. Blanda röret väl. Detta är din första tiofaldiga utspädning.

Ta 1 ml av den blandade kulturen från ditt rör märkt "10 ^ -1" och överför den med en ny pipett till nästa rör, märkt "10 ^ -2 . "Blanda detta rör också.

Fortsätt med detta mönster för att skapa en serieutspädningsserie. Du kommer att sluta med 9 rör av 9 ml och 1 rör med 10 ml. De virala belastningarna i dina rör kommer att spädas var som helst 10 gånger (ditt första rör) eller 100 gånger (ditt andra rör) till tio miljarder gånger (ditt slutliga rör).

Förbereda plattor

Ta 10 rör av tryptonmjuk agar och 10 Petri-plattor och märka dem så att de motsvarar dina serieutspädningsrör.

Lossa kepsarna så att de inte slår ut i värmen och lägg sedan agarrören i en bägare av kokande vatten. Detta kommer att smälta agar så att du kan hälla det i Petri-plattorna.

Överför dina rör till ett badvattenbad med minst 45 grader Celsius. Detta kommer att se till att din agar inte stelnar i rören innan du har en chans att hälla den i en petriskål.

Lägg till två droppar bakteriekultur till din agar och blanda den försiktigt. Dessa är de bakterier som kommer att dödas, så att du kan räkna antalet viruspartiklar i en viss lösning.

Lägg till 1 ml av varje serieutspädning till motsvarande agarrör medan rören fortfarande är i varmt vatten bad. Exempelvis bör 1 ml av din 10 ^ -1 serieutspädning gå in i agarröret märkt "10 ^ -1".

Blanda varje rör och häll sedan varje rör i Petri-plattan med motsvarande etikett. Detta kommer att skapa ett tunt lager av agar som har ympats med bakterier och virus i varje platta. Låt plattorna växa över natten i en inkubator.

Räkna och beräkna Titers

Ta ut dina tallrikar ur inkubatorn och undersök dem. Du bör se grumliga områden i hela plattan där bakterier har vuxit, med undantag för små klara punkter som kallas plack. Dessa plack är fläckar av döda bakterier, och varje plack representerar ett virus.

Hitta en tallrik som har mellan 30 och 300 plackar och räkna det exakta antalet plack på den plåten.

Ta med antal plack på din tallrik och multiplicera med 10. Om du räknade 157 plack skulle du få 1570.

Multiplicera numret som du fick i föregående steg genom invers av numret på ditt utspädningsrör. Om plattan du valde var exempelvis 10 ^ -5-plattan, skulle du multiplicera 1570 med 10 ^ 5 för att få 157000000. Detta slutliga tal är din virustiter och representerar antalet virus per ml av din ursprungliga kultur.

Varning

Var försiktig när du arbetar med virus. Inte alla virus är farliga, men du bör vidta försiktighetsåtgärder. Byt handskar ofta. Torka omedelbart spill och desinficera området.