Spektrofotometrar är väsentliga verktyg för att mäta absorbans och överföring av ljus genom ett prov, vilket ger värdefull information inom områden som kemi, biologi och medicin. Noggrann kalibrering är avgörande för att säkerställa tillförlitliga och exakta mätningar. Här är en uppdelning av processen:
1. Våglängdskalibrering:
* med en standard: Detta är den vanligaste metoden. En känd standard med en specifik absorptionstopp vid en känd våglängd (t.ex. holmiumoxidfilter, didymiumfilter) används.
* Förfarande:
* Standarden placeras i spektrofotometerens strålväg.
* Instrumentets våglängd justeras tills den maximala absorbansen registreras.
* Instrumentet kalibreras sedan till den kända våglängden för standardens topp.
* Betydelse: Säkerställer att instrumentet exakt identifierar våglängderna för ljus som den använder för mätning.
2. Absorbans/överföringskalibrering:
* med ett tomt: En blank är en lösning som innehåller alla komponenter i provet förutom att analyten mäts.
* Förfarande:
* Blanket placeras i spektrofotometerens strålväg.
* Instrumentet är inställt på att läsa 100% transmittans eller 0 absorbans (beroende på instrumentet).
* Detta ställer in baslinjen för alla efterföljande mätningar.
* Betydelse: Detta kalibreringssteg korrigerar för all absorbans eller transmittans orsakad av lösningsmedlet eller andra komponenter i provet som inte är analyt av intresse.
3. Instrumentspecifik kalibrering:
* Kalibreringsstandarder: Vissa spektrofotometrar kräver specifika kalibreringsstandarder (t.ex. lösningar med kända koncentrationer av specifika analytter).
* Förfarande:
* Mät absorbansen eller överföringen av standarderna med spektrofotometern.
* Ange dessa mätningar i instrumentets programvara.
* Instrumentet skapar sedan en kalibreringskurva, som relaterar absorbans eller överföring till koncentration.
* Betydelse: Gör det möjligt för instrumentet att direkt konvertera absorbans eller överföringsläsningar till koncentrationsmätningar för specifika analytter.
Ytterligare tips:
* Regelbunden kalibrering: Ofta kalibrering (dagligen eller varje vecka) är avgörande för att upprätthålla noggrannhet.
* Korrekt underhåll: Att hålla instrumentet rent och fritt från damm, fingeravtryck och repor är avgörande för optimal prestanda.
* Med hjälp av högkvalitativa standarder och reagens: Kalibreringens noggrannhet beror på kvaliteten på de använda standarderna och reagensen.
* Temperaturkontroll: Vissa spektrofotometrar kräver en stabil temperaturmiljö för exakta mätningar.
Obs: De specifika kalibreringsförfarandena och frekvensen kan variera beroende på spektrofotometermodellen och dess avsedda användning. Kontakta alltid instrumentets manual för detaljerade instruktioner.
