Interferoner är proteiner som utgör en viktig del av våra naturliga försvarssystem. Dessa proteiner uppvisar också en anmärkningsvärd antiviral aktivitet. Det rekombinanta humana interferonet α2b (rhIFNα2b) godkändes av U.S. Food and Drug Administration 1986. Det har använts sedan dess som ett antiviralt medel för behandling av hepatit B och hepatit C. Trots dess utbredda tillämpningar finns det dock fortfarande en problem:upptäckten av rhIFNα2b är tråkig och tidskrävande.

Mot denna bakgrund utvecklade forskare från Kina, i en ny studie, nyligen en ny metod för snabb och effektiv detektering av rhIFNα2b. Denna artikel gjordes tillgänglig online den 8 juli 2021 och publicerades i Journal of Pharmaceutical Analysis den 30 april 2022.

För att utveckla sin nya metod, immobiliserade de en ny nanobody på en pappersremsa. Nanokroppen som användes i denna metod härrörde ursprungligen från en alpacka - en art av det sydamerikanska kameldjuret. Därefter genererades det i forskningslaboratoriet med hjälp av rekombinant DNA-teknik - en teknik som används för att subklona DNA-fragment för att erhålla stora mängder syntetiska proteiner. Detta uppnås vanligtvis med hjälp av bakterier eller andra prokaryota celler. En nanokropp är ett funktionellt fragment av en större antikropp. Eftersom den immobiliserade nya nanokroppen binder rhIFNα2b tätt och med hög specificitet, användes den för en snabb och idiotsäker detektion av rhIFNα2b.

Enligt Dr Junzhi Wang, "På grund av fördelarna med nanokroppar i reagenskonservering, produktion och kostnad, har den laterala flödesimmunokromatografiska analysen som använder nanokroppar en hög potential att ersätta traditionella antikroppsbaserade ligandbindande analyser för ett snabbt identifieringstest av rekombinanta proteinterapier."

Forskargruppen karakteriserade bindningen för I22-rhIFNα2b-interaktionen, dvs bindning mellan nanobody 122 och rhIFNα2b, med hjälp av en Octet-plattform. De erhållna uppgifterna indikerade tydligt en tät bindning. Bindningsspecificiteten validerades ytterligare med Western blotting, en teknik som används för att detektera proteiner med hjälp av proteinspecifika antikroppar.

"De rhIFNα2b-produkter som för närvarande är tillgängliga i Kina inkluderar injektioner, injektionspulver, geler och pastor. Immunkromatografiremsorna kan endast användas för att utvärdera vätskor eller produkter i pulverform som kan lösas upp och appliceras på remsorna. Detta beror på att produkten behöver att diffundera längs remsan via kapillärverkan; geler och pastor uppfyller inte detta krav", förklarar Dr Wang.

Ganska intressant nog har den utvecklade rhIFNa2b-detektionsanalysen en detektionsgräns på 1 µg/mL, vilket är lägre än de befintliga gränserna. Detta gör det till en mer känslig labbbaserad teknik för snabb identifiering av rhIFNα2b. En annan stor fördel är användningen av nanokroppar för proteindetektion. Detta beror på att nanokroppar kan erhållas på ett ekonomiskt sätt genom att skörda billiga bakterieceller. Dessutom kan stora volymer av nanokroppar erhållas relativt lätt med hjälp av rutinmässigt använda laboratorietekniker.

Dr Wang säger, "Operationstiden för rhIFNα2b-identifiering förkortades från två dagar till några minuter med vårt test. Det kan därför möta behoven för snabb upptäckt av denna familj av rekombinanta proteinprodukter på marknaden och ge en bra grunden för att förbättra effektiviteten för upptäckt av förfalskningar på marknaden. I framtiden skulle snabb upptäckt kunna utföras på ett allsidigt sätt."

Sammanfattningsvis kan den nyutvecklade metoden bana väg för smidigare, snabbare och exakt detektering av rekombinanta eller artificiellt genererade proteiner, vilket möjliggör tidig diagnos och behandling av hepatit. + Utforska vidare

Nanobody-läkemedelskonjugat kapar den mänskliga vitamin B12-upptagningsvägen