Kemister använder ofta ett instrument som kallas en ultraviolett-synlig, eller UV-Vis, spektrometer för att mäta mängden ultraviolett och synlig strålning som absorberas av föreningar. Mängden ultraviolett eller synlig strålning som absorberas av en förening beror på tre faktorer: provets koncentration, c; väglängden, 1, för provhållaren, som bestämmer avståndet över vilket provet och strålningen interagerar; och koefficienten för molär absorption, e, ibland hänvisad till som den molära extinktionskoefficienten. Ekvationen anges som A \u003d ecl och är känd som Beer's law. Ekvationen innehåller således fyra variabler, och för att bestämma någon av de fyra kräver kända värden för tre.
Beräkningar

Bestäm absorbansen för föreningen vid önskad våglängd. Denna information kan extraheras från absorbansspektrum som produceras av vilket standard som helst UV-Vis-instrument. Spektra planeras normalt som absorbans kontra våglängd i nanometer. I allmänhet indikerar utseendet på alla "toppar" i spektrumet våglängderna av intresse.


Beräkna provets koncentration i mol per liter, mol /L, även känd som molaritet, M. Den allmänna ekvationen för molaritet är


M \u003d (gram prov) /(molekylvikt av förening) /liter lösning.


Till exempel ett prov som innehåller 0,10 gram tetrafenylcyklopentadienon, med en molekylvikt av 384 gram per mol, upplöst och utspädd i metanol till en slutlig volym av 1,00 liter skulle uppvisa en molaritet av: (0,10 g) /(384 g /mol) /(1,00 1) \u003d 0,00026 mol /L.


Bestäm väglängden genom provhållaren. I de flesta fall är detta 1,0 cm. Andra väglängder är möjliga, särskilt när man hanterar provhållare avsedda för gasformiga prover. Många spektroskopister inkluderar sökväglängden med provinformationen tryckt på absorbansspektrum.


Beräkna koefficienten för molabsorption enligt ekvationen A \u003d ecl, där A är absorbans, c är koncentration i mol per liter och l är banlängden i centimeter. Löst för e blir denna ekvation e \u003d A /(cl). Fortsätter exemplet från steg 2 uppvisar tetrafenylcyklopentadienon två maxima i sitt absorbansspektrum: 343 nm och 512 nm. Om banlängden var 1,0 cm och absorbansen vid 343 var 0,89, då


e (343) \u003d A /(cl) \u003d 0,89 /(0,00026 * 1,0) \u003d 3423


Och för absorbansen av 0,35 vid 512 nm,


e (512) \u003d 0,35 /(0,00026 * 1,0) \u003d 1346.