Det främsta skälet till att du sminkar ett prov innan du lägger det under mikroskopet är att få en bättre titt på det, men färgning gör mycket mer än att bara markera cellens konturer. Vissa fläckar kan tränga igenom cellväggar och markera cellkomponenter, och detta kan hjälpa forskare att visualisera metaboliska processer. Fläckar hjälper också att skilja mellan levande celler och döda. Vidare tillåter färgning forskare att räkna antalet celler av en viss typ inom en viss biomassa. Tjugo eller fler olika typer av fläckar finns, och var och en har sitt syfte.
TL; DR (för länge, läste inte)
Det huvudsakliga syftet med färgning är att markera celler och delar av celler. Över 20 olika typer av fläckar finns och typen av fläck du använder beror på vad du letar efter.
Typer av fläckar
Valet av fläck beror på vad du letar efter. Inte alla fläckar är lämpliga för levande celler, men de som innehåller Bismarckbrunt, toluenrödt, Nile Blue och Nile Red, och vissa fluorescenter används för att markera DNA. Vissa fläckar markerar sporer, vissa upptäcker lipider och proteiner, och vissa ändrar färg i närvaro av stärkelse. Syftet med undersökningen bestämmer vilken typ av fläck som ska användas. Till exempel, en läkare som utför ett PAP-smörjmedel skulle använda Eosin Y. Det är ett surt fluorescerande färgämne som blir röd när det kommer i kontakt med röda blodkroppar, cytoplasma och cellmembran. Det används också för att testa blodmärg.
I vissa fall kan en utredare använda mer än en fläck. Till exempel är hematoxylin en fläck som förvandlar cellkärnor blå. När den används tillsammans med eosin, som vänder de andra delarna av cellen röd eller rosa, ger den en starkare kontrast och gör kärnorna enklare att skilja. PAP-smuts och blodprover är enklare att undersöka när dessa två fläckar används tillsammans.
Grams fläck: Sjukhusarbetare använder Grams fläck för att identifiera skadliga bakterier. Detta är faktiskt en serie färgämnen som har olika effekter på olika typer av bakterier och ger läkare ett viktigt diagnostiskt verktyg. Grams fläck är en tredelad process. I det första läggs Hucker kristallviolett, vilket fläckar alla bakterier en likformig violett färg. I nästa steg tillsätts jodfärg vilket medför att färgen klibbar till Gram-positiva celler, vilka huvudsakligen är Staphylococcus och Streptococcus. Fläcken tvättas bort och lämnar de Gram-positiva cellerna med en distinkt violett färg; sedan introduceras en tredje fläck, Safranine O, för att förbättra kontrasten mellan de gramnegativa bakterierna och resten av materialet i bilden.
Färgproceduren
Vid beredning av ett prov på en glida, du kan torka eller våtmontera den, du kan skära den i en tunn sektion eller du kan smarta den. Vid användning av en fläck är det vanliga förfarandet att våtmontera provet, vilket innebär att man lägger en droppe vatten på glidbanan, sätt provet i vattnet och täck det med ett lock. Därefter applicerar du fläcken till ett hörn av glidglaset med en droppare och låter det dras mot provet genom kapillärverkan. Det bidrar till att lägga en pappershandduk på motsatta sidan av bilden för att locka vattnet. När fläcken har spridit sig över hela bilden är provet klart för undersökning.
