Forskare och tekniker behöver ofta beräkna koncentrationen av celler i en suspension. Till exempel, när en patient får blodet ritat på en läkarmottagning, kan laboratoriet använda vissa metoder för att leta efter mängden vita blodkroppar i en given volym blod. Detta ger läkaren mycket information om hälsan om hennes patient, särskilt hans immunförsvar och om han kämpar för en infektion eller annan sjukdom. Tester som detta kan leta efter många andra celler i blod, såväl som ryggradsvätska och andra kroppsvätskor, såsom spermier i säd för fertilitetsändamål. Forskare beräknar också cellkoncentrationer av bakterier, jäst och andra mikroorganismer för många ändamål, allt från ekologisk forskning till industriell teknik. En av de vanligaste teknikerna lärs också i många högskolebiologi klasser, och det använder en enhet som kallas en räkningskammare.
Spola provet
Innan cellupphängningen går in i räkningskammaren , det kan behöva utspädning eftersom det kan innehålla tusentals eller miljontals celler. I så fall kan cellerna inte rimligen räknas. För att späda provet använd en steril pipett för att placera tio mikroliter av celllösningen i ett provrör innehållande 90 mikroliter av ett utspädningsmedel. Typ av utspädningsmedel beror på typen av cell. Blanda det bra. Denna lösning är nu tio gånger mer utspädd än det ursprungliga provet, så dess utspädningsfaktor är 10 -1. Märk det. Upprepa detta flera gånger, använd en steril pipett varje gång tills lösningen är utspädd nog. Om du spädde det en andra gång var det andra provröret 100 gånger mer utspätt än den ursprungliga lösningen, så utspädningsfaktorn var 10 -2 och så vidare. Räkna cellerna Du kan behöva prova flera utspädningar för att bestämma rätt utspädningsfaktor för räkningskammaren. En räknarkammare är i grunden en mycket liten, klar, rektangulär låd med ett exakt djup och ett exakt galler insatt över toppen. Det är också känt som en hemocytometer, eller ibland en hemacytometer. Syftet är att suspensionen ska vara utspädd nog att när det ses i räkningskammaren överlappar inga celler varandra och de fördelas över hela gallret på ett enhetligt sätt. Pipettera den utspädda suspensionen som innehåller cellerna i brunnen i räknekammaren, där den kommer att sätta sig in i gallerkammaren genom kapillärverkan. Placera räkningskammaren på mikroskopsteget och se den under låg effekt. Rutenettet innehåller rutor som är tillverkade av ännu mindre kvadrater. Välj ungefär fyra eller fem rutor, eller hur många du behöver räkna minst 100 celler, i ett mönster som du väljer, till exempel de fyra hörnen och en mittkorg. Om cellerna är stora kan dessa vara de stora rutorna, men om cellerna är små kan du välja de mindre rutorna istället. Beräkningskoncentration Den specifika volymen för varje rutnät kan varierar genom att räkna kammarproducenten, men kammarens djup är ofta 0,1 millimeter, området för de stora rutorna är 1 kvadrat millimeter och arean på de mindre rutorna är 0,04 kvadratmilimeter. De större rutorna har då en volym av 0,1 kubikmeter. För detta exempel antar du att du räknade totalt 103 celler i fem rutor och att du spädde det ursprungliga provet tills utspädningsfaktorn var 10 -2. Om varje rutnätkant har en volym av 0,1 kubikmilimeter och fem räknades, var den totala volymen av kammaren som räknades 0,5 kubikmilimeter, och det fanns 103 celler. Doubled för att göra det 1 kubik millimeter skulle göra det 206 celler. En kubikcentimeter motsvarar 1 milliliter, vilket är en användbar mätning för vätskor. Det finns 1000 kubikmeter i en kubikcentimeter. Om du hade haft en kubikcentimeter eller en milliliter av suspensionen hade du därför räknat 206 000 (206 x 1000) celler. Det här är hur det ser ut som en ekvation: Räknade ruta × Antal räknade räknade = Total volym räknat upphängning Antal celler ÷ Räknat uppslagsvolym = Celltal per millimeter cubed Celltal per millimeter cubed × 1000 = cellantal per milliliter Beräkning av otvättad koncentration Du måste redogöra för eventuell utspädning som gör att den ursprungliga lösningen kan räknas under mikroskopet. I detta exempel är utspädningsfaktorn 10 -2. För att beräkna den ursprungliga koncentrationen av lösningen: Cellantal per milliliter ÷ utspädningsfaktor = Cellkoncentration För detta exempel är cellantalet per milliliter 206 000 och dividerar det med 10 -2 (0,01) ger en cellkoncentration av 20.600.000 celler per milliliter i det ursprungliga provet.
