1. provberedning:
* DNA extraheras från celler och digereras sedan med restriktionsenzymer. Dessa enzymer skär DNA vid specifika sekvenser, vilket skapar fragment av olika storlekar.
* DNA -fragmenten blandas sedan med en belastningsbuffert som innehåller ett färgämne (vanligtvis bromofenolblått) för synlighet och en tät lösning (som glycerol) för att hjälpa dem att sjunka in i gelén.
2. gelförberedelse:
* En gel görs med ett poröst material som agaros eller polyakrylamid. Gelén fungerar som en sikt, vilket gör att mindre DNA -fragment kan röra sig igenom det lättare än större fragment.
* Gelén placeras i en elektroforeskammare fylld med en buffertlösning som utför elektricitet.
3. elektrofores:
* DNA -proverna laddas i brunnar i ena änden av gelén.
* En elektrisk ström appliceras över gelén.
* DNA är negativt laddat, så det migrerar mot den positiva elektroden.
* Mindre DNA -fragment rör sig genom gelén snabbare än större fragment, vilket resulterar i en separation baserad på storlek.
4. Visualisering:
* Efter elektrofores färgas DNA -fragmenten med ett fluorescerande färgämne (som etidiumbromid eller SYBR -grön) som binder till DNA och kan visualiseras under UV -ljus.
* DNA -fragmenten visas som band på gelén, med mindre fragment som visas längre ner i gelén.
Andra metoder för att separera DNA -segment av olika längder:
* kromatografi: Denna metod använder olika egenskaper hos DNA -fragmenten för att separera dem, till exempel deras affinitet för en stationär fas.
* kapillärelektrofores: Liknar gelelektrofores men använder ett smalt kapillärrör istället för en gel. Denna metod erbjuder högre upplösning och snabbare separering.
* Fältflödesfraktionering (FFF): Denna teknik separerar molekyler baserat på deras storlek och diffusionsegenskaper. Den använder ett laminärt flöde av en bärvätska och ett fält (som ett gravitations- eller elektriskt fält) för att separera partiklar.
Applikationer av DNA -separering:
* genetisk analys: Identifiera mutationer, genetiska störningar och faderskapstest.
* kriminaltekniker: Matchande DNA -prover från brottsscener till misstänkta.
* Forskning: Studera genuttryck, genreglering och proteininteraktioner.
* bioteknik: Utveckla nya läkemedel och diagnostiska verktyg.
Valet av metod för att separera DNA -segment beror på den specifika applikationen och storleksintervallet för fragmenten som studeras.
