1. Bekräftelse av Insert Integration:
* Restriktionsenzym matsmältning och analys: Om den genetiska modifieringen innebär att infoga en specifik gen, kan DNA från den modifierade organismen smälts med restriktionsenzymer som skärs på specifika ställen i den infogade genen. De resulterande fragmenten kan sedan separeras genom gelelektrofores. Närvaron av de förväntade fragmentstorlekarna bekräftar integrationen av genen.
* PCR -amplifiering och analys: Specifika primrar kan utformas för att förstärka den insatta gensekvensen. Närvaron av den förstärkta produkten indikerar en framgångsrik integration av genen.
2. Verifiering av uttryck:
* RNA -isolering och analys: RNA extraherat från den modifierade organismen kan analyseras genom gelelektrofores för att detektera närvaron av mRNA motsvarande den insatta genen. Detta bekräftar att genen transkriberas.
* Western blot -analys: Denna teknik kan detektera närvaron av proteinprodukten från den insatta genen.
Exempel:
Föreställ dig att du har genetiskt modifierat en växt för att uttrycka en gen för herbicidresistens.
* Steg 1: Du skulle isolera DNA från både de modifierade och omodifierade växterna.
* Steg 2: Du skulle använda restriktionsenzymer för att minska DNA, särskilt inriktade på regionen där herbicidresistensgenen infördes.
* Steg 3: Du skulle köra det digererade DNA på en gelelektroforesapparat.
* Steg 4: Du letar efter ett specifikt band i gelén som motsvarar storleken på den insatta genen. Om bandet är närvarande i den modifierade växten men frånvarande i den omodifierade växten, bekräftar det den framgångsrika integrationen av genen.
Begränsningar:
* Gelelektrofores är inte alltid den mest känsliga tekniken. Det kanske inte upptäcker små förändringar i genuttryck eller små mängder insatt DNA.
* Det kan vara svårt att skilja mellan olika typer av mutationer eller geninsertioner med användning av gelelektrofores ensam.
* Medan gelelektrofores kan bekräfta närvaron av den önskade genen, kan den inte bekräfta sin funktionalitet. Ytterligare funktionella studier behövs för att bekräfta att genen verkligen uttrycks och fungerar korrekt.
Andra tekniker:
Gelelektrofores används ofta i samband med andra tekniker som sekvensering, södra blotting och qPCR för att ge en mer omfattande bedömning av det genetiska modifieringsexperimentet.
Sammanfattningsvis är gelelektrofores ett kraftfullt verktyg för att analysera DNA och RNA och kan användas för att bedöma framgången för ett genetiskt modifieringsexperiment. Det är emellertid avgörande att använda andra metoder och tekniker för att bekräfta resultaten och utvärdera experimentets framgång.
