1. Förberedelse av jonbyteskolumnen:
- En jonbytarkolonn är packad med ett harts som innehåller laddade grupper som kan attrahera och binda till motsatt laddade molekyler (joner).
- Hartset kan vara antingen positivt laddat (katjonbytarharts) eller negativt laddat (anjonbytarharts).
2. Exempelapplikation:
- Aminosyrablandningen eller provet appliceras på jonbytarkolonnen.
3. Buffertlösningar:
- Olika buffertlösningar med varierande pH och saltkoncentrationer förs genom kolonnen.
4. Elektrostatisk interaktion:
– Aminosyror har olika nettoladdningar vid olika pH-värden på grund av närvaron av olika laddade funktionella grupper.
- När buffertlösningarna passerar genom kolonnen interagerar aminosyror med de laddade grupperna i hartset baserat på deras nettoladdningar.
- Positivt laddade aminosyror (katjoner) kommer att binda till det negativt laddade hartset vid katjonbyteskromatografi, medan negativt laddade aminosyror (anjoner) kommer att binda till det positivt laddade hartset vid anjonbyteskromatografi.
5. Eluering:
- Genom att ändra buffertlösningarnas pH eller saltkoncentration kan styrkan på de elektrostatiska interaktionerna mellan aminosyrorna och hartset modifieras.
- När buffertförhållandena ändras kommer olika aminosyror att eluera (tvättas av) från kolonnen vid olika tidpunkter.
– Denna elueringsprocess separerar aminosyrorna baserat på deras laddningsskillnader.
6. Detektering och insamling:
- När aminosyrorna eluerar från kolonnen detekteras de med hjälp av en detektor, såsom en ultraviolett-synlig (UV-Vis) detektor.
– Aminosyrorna kan sedan samlas in som separata fraktioner.
7. Fraktionering och analys:
- De uppsamlade fraktionerna analyseras sedan ytterligare och karakteriseras med hjälp av tekniker som tunnskiktskromatografi (TLC) eller elektrofores för att bekräfta identiteten av de separerade aminosyrorna.
Jonbyteskromatografi används i stor utsträckning för att separera och rena aminosyror, proteiner och andra laddade molekyler. Det ger exakt kontroll över separationen av föreningar baserat på deras specifika laddningsegenskaper.
