Förstå processen
* extraktion: Xanthophyll extraheras från ett källmaterial (t.ex. växtblad) med användning av etanol.
* spektrofotometri: Koncentrationen av xantofyll i etanollösningen bestäms med användning av en spektrofotometer. Xanthophyll absorberar ljus vid specifika våglängder, och mängden som absorberas är proportionell mot dess koncentration.
Metoder
Här är två vanliga metoder för att beräkna xantofyllkoncentration:
1. Använda en standardkurva
* Förbered en standardlösning: Skaffa en ren xantofyllstandard. Lös upp en känd vikt av standarden i etanol för att skapa en stamlösning av känd koncentration.
* Skapa en standardkurva: Utspäd av stamlösningen för att skapa en serie lösningar med kända koncentrationer (t.ex. 10, 20, 30, 40, 50 ug/ml).
* Mät absorbans: Använd en spektrofotometer för att mäta absorbansen för varje standardlösning vid den maximala absorbansvåglängden för xantofyll (vanligtvis cirka 440-450 nm).
* Plotta standardkurvan: Plotta absorbansvärdena på y-axeln och motsvarande koncentrationer på x-axeln. Detta kommer att skapa ett linjärt samband mellan absorbans och koncentration.
* Mät okänt prov: Kör ditt extraherade xantofyllprov genom spektrofotometern vid samma våglängd. Hitta motsvarande koncentration på din standardkurva baserat på den uppmätta absorbansen.
2. Använda Beer-Lambert Law
* Beer-Lambert Law: Denna lag säger att absorbans (a) är direkt proportionell mot koncentrationen (c) för analyt och väglängden (l) på ljusstrålen genom lösningen. Ekvationen är:A =εCl, där ε är den molära absorptiviteten (en konstant specifik för analyt).
* Bestäm molös absorptivitet (ε): Detta värde tillhandahålls vanligtvis i litteratur eller kan bestämmas experimentellt med hjälp av en standardlösning.
* Mät absorbans: Mät absorbansen för ditt extraherade xantofyllprov vid den maximala absorbansvåglängden.
* Beräkna koncentration: Ordna om Beer-Lambert-lagekvationen för att lösa för koncentration:C =A / (εL).
Överväganden:
* Extraktionseffektivitet: Se till att extraktionsprocessen är effektiv och att all xantofyll har extraherats från källmaterialet.
* lösningsmedel renhet: Använd etanol av hög kvalitet för att undvika störningar från föroreningar.
* kalibrering: Kalibrera alltid din spektrofotometer innan mätningar för att säkerställa exakta resultat.
* Våglängdsval: Välj rätt våglängd för maximal absorbans av xantofyll (vanligtvis cirka 440-450 nm).
* störande föreningar: Var medveten om att andra pigment i ditt prov kan absorbera vid liknande våglängder. Använd vid behov en metod för att separera xantofyll från dessa störande föreningar.
Exempelberäkning:
Låt oss anta att du har ett xantophyll -extrakt i etanol med en absorbans av 0,500 vid 450 nm. Den molära absorptiviteten (ε) av xantofyll vid 450 nm är 25 000 m⁻cm⁻ och väglängden (l) för din kyvett är 1 cm.
Använda Beer-Lambert-lagen:
c =a / (εl)
c =0,500 / (25 000 m⁻cm⁻ × 1 cm)
c =2,0 × 10 m (eller 20 um)
Viktig anmärkning: Detta är ett förenklat exempel. Den specifika metoden och beräkningarna beror på de specifika omständigheterna och utrustningen du använder. Kontakta alltid relevant litteratur och protokoll för exakta resultat.
