Förstå grunderna

* Tris-HCl: Detta är en buffertlösning gjord genom att kombinera Tris (tris(hydroximetyl)aminometan) med saltsyra (HCl).

* 10 mM: Detta står för 10 millimolar, vilket indikerar koncentrationen av lösningen. Det betyder att det finns 10 millimol Tris-HCl per liter lösning.

Material

* Tris bas (fri bas): Du behöver en viss mängd Tris baspulver.

* Saltsyra (HCl): Du behöver en koncentrerad lösning av HCl (vanligtvis 1M eller 12M).

* Avjoniserat vatten: Använd avjoniserat vatten av hög kvalitet för noggrannhet.

* Skärmcylinder: För att mäta volymer exakt.

* Våg: För noggrann vägning av Tris baspulvret.

* pH-mätare (valfritt): För exakt pH-justering.

Beräkningar

1. Molekylvikt för Tris-bas: Molekylvikten för Tris-bas är 121,14 g/mol.

2. Beräkna massan av Tris-bas som behövs: Du kommer att använda följande formel för att beräkna massan av Tris-bas:

* Massa (g) =(Koncentration (mM) × Molekylvikt (g/mol) × Volym (L)) / 1000

* För en 10 mM lösning i 1 liter (1000 ml):

* Massa =(10 mM × 121,14 g/mol × 1 L) / 1000

* Massa =1,2114 g

Procedur

1. Väg Tris-basen: Väg noggrant upp den beräknade mängden Tris-bas (1,2114 g för 1 liter).

2. Lös upp Tris-basen i vatten: Tillsätt Tris-basen till cirka 800 ml avjoniserat vatten i en lämplig behållare. Rör om tills pulvret löst sig helt.

3. Justera pH:

* Använda en pH-mätare: Tillsätt koncentrerad HCl droppvis till Tris-lösningen medan du ständigt övervakar pH med en pH-mätare. Justera pH till önskat värde (vanligtvis runt 7,5 till 8,5 för Tris-HCl-buffertar).

* Utan pH-mätare: Tillsätt cirka 0,5 ml koncentrerad HCl (för en 1 L lösning). Rör om lösningen och kontrollera pH med pH-papper. Justera HCl-volymen i enlighet därmed tills det önskade pH-värdet uppnås.

4. Ta upp lösningen till slutlig volym: Efter justering av pH, tillsätt avjoniserat vatten för att få den totala volymen av lösningen till 1 liter.

5. Sterilisering: Sterilisera lösningen vid behov genom autoklavering.

Viktiga anmärkningar

* pH-justering: Den exakta mängden HCl som behövs för att nå det önskade pH-värdet kommer att variera något beroende på renheten hos Tris-basen och koncentrationen av HCl-lösningen.

* Noggrannhet: Använd exakta vågar och graderade cylindrar för att säkerställa exakt förberedelse.

* Lagring: Förvara Tris-HCl-lösningen i rumstemperatur eller i kylskåp.

* Hållbarhet: Tris-HCl-lösningar har i allmänhet en bra hållbarhet, men det är alltid bäst att kontrollera om det finns tecken på nedbrytning (t.ex. missfärgning, grumlighet).

Meddela mig om du har några frågor eller vill förbereda en annan koncentration eller volym av Tris-HCl-lösning. Hjälper gärna till!