Av Carla Boulianne Uppdaterad 24 mars 2022
Buffertlösningar motstår förändringar i pH eftersom de innehåller svaga syra-baskonjugat som neutraliserar H+ och OH-joner. Buffertlösningar består av svaga syror eller baser och saltet av den syran eller basen. Valet av ett lämpligt buffertsystem beror på pH-intervallet för buffring. De flesta biologiska reaktioner inträffar vid ett pH-intervall på 6 till 8. Fosfatbuffrar buffertar över pH-intervallet 6,5 till 7,5. Karboxylsyrabuffertar är användbara från pH 3 till 6. Boratbuffertar fungerar från pH 8,5 till 10. Aminosyrabuffertar såsom glycin och histidin fungerar över en mångfald av pH-intervall. Tris buffert är ett av de vanligaste buffertsystemen i biologilabb. Beräkningar för en Tris-buffertlösning kommer att användas i följande exempel, men metoden gäller för alla buffertlösningar.
Använd produkten av den slutliga lösningens molaritet och volym för att bestämma antal mol bas som krävs. Till exempel, om 2 liter av en 0,1 M lösning av Tris-buffert behövs, är antalet mol Tris som krävs:
0,1 mol/liter x 2 liter =0,2 mol Tris-bas
Beräkna mängden buffert som krävs genom att multiplicera antalet mol som behövs med basens molekylvikt. Till exempel är massan av 0,2 mol Tris-bas lika med:
0,2 mol Tris x 121,1 g/mol Tris =24,22 g Tris
Mät lämplig basmassa på en skala.
Lös basen i destillerat vatten med hjälp av en magnetisk omrörarstav och omrörande värmeplatta. Lös den i en volym vatten som bara är något mindre än den slutliga lösningsvolymen (950 till 975 ml för varje liter slutlig lösning). Tris-buffertens pH ändras med koncentrationen och behöver justeras om en för liten initial volym används. Det är också bäst att förbereda bufferten vid samma temperatur som den kommer att användas under analysen eller experimentet eftersom Tris har stora temperaturberoende förändringar i pH.
Titrera den vattenhaltiga Tris-lösningen med 1 M saltsyra med en pH-mätare.
Häll lösningen till den slutliga volymen med destillerat vatten i en mätkolv.
För att spara tid när du bereder en buffertlösning kan du använda förgjorda buffertkoncentrat vid erforderligt pH och späda för önskad molaritet och volym.
Förbered buffertlösning vid samma temperatur som den kommer att användas för att undvika betydande pH-förändringar.
Undvik tidskrävande pH-justeringar, titrera endast efter spädning till önskad koncentration. Upplösning i för liten volym kommer att leda till upprepade titreringar.
Var försiktig när du hanterar syror och baser.
Använd skyddsglasögon.
