Isolering av bakterier från jord är ett viktigt första steg i många mikrobiologiska experiment. När de är isolerade kan bakterier analyseras ytterligare för att bestämma saker, såsom deras art och deras funktion i jordmiljön. Till och med en liten mängd jord kan innehålla miljontals bakterier, vilket gör det nödvändigt att späda ett markprov innan isolering av bakterier ur provet.

Mät 100 ml. destillerat vatten i den graderade cylindern och lägg den till den sterila flaskan.

Väg ut 1 g av markprovet och lägg det till flaskan destillerat vatten. Lätt täppa till flaskan och skaka den för att blanda lösningen ordentligt.

Märka de sterila provrören "10 ^ -3", "10 ^ -4", "10 ^ -5" och "10 ^ -" 6." Tillsätt 9 ml destillerat vatten till var och en av rören med en pipett.

Överför 1 ml av lösningen i flaskan till röret märkt "10 ^ -3" med en ny pipett. Lossa röret och vrid det försiktigt tills lösningen är väl blandad.

Överför 1 ml av lösningen i provröret "10 ^ -3" till röret "10 ^ -4" med en ny pipett. Häll "10 ^ -4" röret och virvla runt för att blanda. Upprepa denna metod för att överföra lösningen från "10 ^ -4" -röret till "10 ^ -5" -röret och sedan från "10 ^ -5" -röret till "10 ^ -6" -röret.

Placera tre prov vardera från rören "10 ^ -4", "10 ^ -5" och "10 ^ -6". Använd en ny pipett för att överföra 1 ml lösning från röret till en Petri-platta. Tillsätt ca 15 ml näringsagar till plattan; Placera sedan locket på plattan och virvla så att agar täcker plattans botten.

Gör en kontrollplatta genom att placera 1 ml destillerat vatten i en Petri-platta med en ny pipett. Lägg till agar; Sätt på locket och vrida plattan.

Låt Petri-plattorna stå upprätt tills agaren har satt. Vänd sedan in plattorna och inkubera dem - antingen i en inkubator eller vid rumstemperatur - i så lite som 24 timmar och upp till fem dagar.

Ta bort plattorna från inkubatorn efter önskad inkubationstid. Räkna bakteriekolonierna på plattor innehållande ca 30 till 300 kolonier. Använd en permanent markering för att markera de kolonier du redan har räknat för för att undvika att räkna samma kolonier två gånger.

Dela antalet kolonier som räknas av utspädningen "10 ^ -4", "10 ^ -5 "eller" 10 ^ -6 "av jordlösningen för varje platta. Hitta antalet odlingsbara bakterier i ursprungligt gram jord genom att medelvärda resultaten från varje räknbar tallrik.

TL; DR (för länge, läste inte)

Följ aseptiska laboratorietekniker överallt Förfarandet.

Varning

För att förhindra förorening och eventuell infektion från bakterierna, se till att alla Petri-plattor, jordlösningar och pipetter bortskaffas på rätt sätt.

Endast den här proceduren mäter odlingsbara bakterier. Enligt Cornell University kommer mellan 90 och 99 procent av markbakterierna inte att växa på näringsagar