Deoxiribonukleinsyra och proteiner. DNA är organiserat i enheter som kallas gener, vilka alla kodar för en viss RNA- eller proteinsekvens. Gener studeras för att lära sig om biologisk struktur och funktion, utveckling, sjukdom och många andra aspekter av levande system. För att studera gener i detalj måste DNA isoleras och renas från celler av intresse.

DNA-extraktion

Även om DNA från en enda cell kan extraheras och studeras är det inte tillräckligt att se med blotta ögat. För att få en mängd som är tillräcklig för spooling, desto fler celler måste du arbeta med det bättre (många miljoner).

Exakta protokoll varierar avsevärt för att ta hänsyn till de specifika provernas unika egenskaper, men de allmänna stegen är homogenisering, lysis, matsmältning, separation och uppsamling. Proceduren utförs bäst i en liten (beroende på provets storlek) glas eller plaströr.

Ett prov är vanligtvis blandat eller grundat för att separera cellerna ordentligt från varandra. Detta gör cellingredienserna mer tillgängliga för de reagens som följer. Detergent eller enzymer tillsättes sedan till homogenatet för att lysa cellmembranen (och kärnmembran om cellerna är eukaryota) för att frigöra DNA. Vid denna tidpunkt omges DNA-proteiner, lipider, kolhydrater --- allt annat som finns i cellerna.

En ytterligare enzymatisk digestion kan vara nödvändig för att bryta ner proteiner så att de inte binder till DNA och störa dess samling. DNA separeras från resten av cellinnehållet genom tillsats av kall, ren, etyl eller isopropylalkohol. DNA är inte lösligt i dessa alkoholer, så det kommer att kondensera för att försöka minimera sin kontakt med alkoholen. Det kondenserade DNA s uppsamlas sedan, vanligen genom centrifugering --- eller spolning.

DNA-spolning

DNA-samling genom spolning är effektiv när en stor mängd DNA erhålls från en extraktionsprocedur. Det är också en utmärkt demonstrationsmetod eftersom en imponerande fläck av rent DNA är tydligt synligt.

För att spola DNA måste separationssteget genomföras noggrant. Om det inte var en del av den lysisreagensblandning som tidigare tillsattes måste en koncentrerad saltlösning (natriumklorid) sättas till lösningen före alkoholadditionssteget. Den kalla alkoholen hälls långsamt ner på provrörets sida för att bilda ett skikt ovanpå den vattenhaltiga lösningen, vilket undviker blandning. Om det görs korrekt bildar alkoholen sitt eget lager ovanpå det salta lagret. Då kommer spolningen.

För att samla DNA från det salta skiktet, lägg försiktigt en glasrörstång om alkoholskiktet tills det rör rörets botten. Långsamt rotera stången mellan fingrarna medan du tittar på gränssnittet mellan de två skikten. Om tillräckligt med DNA är närvarande kommer det att klumpa samman vid gränssnittet mellan skikten för att bilda en mjölkaktig genomskinlig massa. Vrid stången för att linda DNAet runt det (det är spoldelen) och dra ut det ur röret. DNA kan överföras till ett annat rör med ren alkohol för lagring eller ytterligare analys.