Buffertlösningar motstår förändringar i pH eftersom de innehåller svaga syrabaskonjugat som neutraliserar H + och OH-joner. Buffertlösningar består av svaga syror eller baser och saltet av den syran eller basen. Val av ett lämpligt buffersystem beror på pH-intervallet för buffring. De flesta biologiska reaktioner uppträder vid ett pH-område av 6 till 8. Fosfatbuffertbufferten över pH-intervallet 6,5 till 7,5. Karboxylsyrabuffertar är användbara från pH 3 till 6. Boratbuffertar fungerar från pH 8,5 till 10. Aminosyrabuffertar såsom glycin och histidin utför över ett mångfald av pH-intervall. Tris-buffert är ett av de mest använda buffertsystemen i biologilaboratorier. Beräkningar för en Tris-buffertlösning kommer att användas i följande exempel, men metoden gäller alla buffertlösningar.

Använd produkten av den slutliga lösningen, molaritet och volym för att bestämma mol bas som krävs. Om till exempel, om 2 liter av en 0,1 M lösning av Tris-buffert behövs, behövs det antal mol Tris som krävs:

0,1 mol /liter x 2 liter = 0,2 mol Tris bas

Beräkna massan av buffert som krävs genom att multiplicera antalet mol som behövs av basens molekylvikt. Exempelvis är massan 0,2 mol Tris bas lika med:

0,2 mol Tris x 121,1 g /mol Tris = 24,22 g Tris

Mäta lämplig massa av bas på en skala.

Lös upp basen i destillerat vatten med hjälp av en magnetisk omrörningsstång och omrör varmplåten. Lös upp det i en volym vatten endast lite mindre än den slutliga lösningsvolymen (950 till 975 ml för varje liter slutlig lösning). PH-värdet för Tris-bufferten förändras med koncentration och behöver justeras om för liten en initialvolym används. Det är också bäst att förbereda bufferten vid samma temperatur som den kommer att användas under analysen eller experimentet, eftersom Tris har stora temperaturberoende förändringar i pH.

Titrera den vattenhaltiga Tris-lösningen med 1 M saltsyra med ett pH mätare.

Ta lösningen till slutvolymen med destillerat vatten i en volymkolv.

Tips

För att spara tid när du förbereder en buffertlösning kan du använda färdiga buffertkoncentrat vid önskat pH och späd ut för önskad molaritet och volym.

Förbered buffertlösning vid samma temperatur som den kommer att användas för att undvika signifikanta pH-förändringar.

Undvik tidskrävande pH-justeringar, titrera först efter spädning till önskad koncentration. Upplösning i för liten volym kommer att leda till upprepade titreringar.

Varning

Var försiktig vid hantering av syror och baser.

Använd skyddsglasögon.