Kemister använder högpresterande vätskekromatografi, eller HPLC, för att separera blandningar av föreningar. I allmänhet består metoden av att injicera ett prov i en kolonn där det blandas med ett eller flera lösningsmedel. Olika föreningar adsorberar eller "sticker" till kolumnen i olika grader; och när lösningsmedlet pressar föreningarna genom kolonnen, kommer en av komponenterna i blandningen först ut ur kolonnen. Instrumentet detekterar föreningarna när de lämnar kolonnen och producerar ett kromatogram som består av en kurva med retentionstid på x-axeln och signalintensiteten från detektorn på y-axeln. När föreningarna lämnar kolonnen producerar de "toppar" i kromatogrammet. I allmänhet, ju längre isär och ju smalare topparna i kromatogrammet är, desto högre är upplösningen. Forskare överväger en upplösning på 1,0 eller högre för att representera en adekvat separering.
Mät bredden på två intilliggande toppar i kromatogrammet genom att notera var x-axelvärdena ligger i basen för varje topp. X-axeln representerar retentionstid, mätt vanligtvis i sekunder. Således, om en topp börjar vid 15,1 sekunder och slutar vid 18,5 sekunder, är dess bredd (18,5 - 15,1) \u003d 3,4 sekunder.
Bestäm retentionstiderna genom att notera tiden, dvs platsen på x- axel, som motsvarar platserna för topparna maxima. Detta värde är normalt ungefär halvvägs mellan de två värden som används för att beräkna bredden i steg 1. Exemplet som till exempel ges i steg 1 skulle uppvisa ett maximum vid cirka 16,8 sekunder.
Beräkna upplösningen, R , mellan två toppar med där RT1 och RT2 representerar retentionstiderna för topparna 1 och 2, och W1 och W2 representerar breddarna på topparna tagna vid deras baser. Fortsätter exemplet från steg 2 och 3 uppvisar en topp en retentionstid på 16,8 sekunder och en bredd av 3,4 sekunder. Om den andra toppen uppvisade en retentionstid på 21,4 sekunder med en bredd av 3,6 sekunder, skulle upplösningen vara R \u003d (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] \u003d 4,6 /3,5 \u003d 1,3.
