1. Tillväxtmedium: LB Agar ger en näringsrik miljö för bakterier att växa och multiplicera. Den innehåller viktiga näringsämnen som tryptone, jästextrakt och natriumklorid, som stöder bakterietillväxt och uppdelning.
2. Urval och identifiering: LB -plattor kan kompletteras med specifika antibiotika, såsom ampicillin eller kanamycin. Detta möjliggör val av bakteriekolonier som har transformerats med en plasmid som innehåller antibiotikaresistensgenen. Endast bakterierna som bär plasmiden kommer att överleva på den antibiotikainnehållande LB-plattan, vilket möjliggör identifiering av framgångsrika transformerade celler.
I processen att göra kompetenta celler används LB -plattor för:
* växande bakterier: Startbakterierna odlas först på LB -plattor för att erhålla ett stort antal celler.
* Val av transformerade celler: Efter transformation pläteras bakterierna på LB -plattor som innehåller lämpligt antibiotikum. Endast de transformerade cellerna som bär resistensgenen kommer att växa och bilda kolonier.
Viktiga aspekter av LB -plattor för att göra kompetenta celler:
* Komposition: LB -agar innehåller vanligtvis 1% tryptone, 0,5% jästextrakt, 1% NaCl och 1,5% agar.
* Temperatur: LB -plattor inkuberas vanligtvis vid 37 ° C, den optimala temperaturen för bakterietillväxt.
* Antibiotikaval: Det specifika antibiotikum som används beror på att plasmiden används för transformation.
* Colony Formation: Efter inkubation kommer transformerade bakterier att bilda synliga kolonier på LB -plattan, som sedan kan analyseras ytterligare.
Sammanfattningsvis: LB -plattor ger ett lämpligt medium för bakterietillväxt och möjliggör val av transformerade celler baserat på antibiotikaresistens. De är ett viktigt verktyg i processen att göra kompetenta celler för genkloning och andra molekylära biologitekniker.
