1. DNA -fragmentanalys:
* Restriktionsenzym matsmältning: Under kloning använder du restriktionsenzymer för att minska ditt DNA av intresse och vektorn (plasmid) vid specifika sekvenser. Detta genererar DNA -fragment av olika storlekar.
* gelelektrofores: DNA -fragmenten separeras sedan baserat på deras storlek med användning av gelelektrofores. En gelmatris (vanligtvis agaros) används och en elektrisk ström appliceras. Mindre fragment rör sig snabbare och längre genom gelén än större fragment.
* Visualisering: DNA -fragmenten visualiseras med användning av ett färgämne som binder till DNA och fluoresces under UV -ljus. Detta gör att du kan se de olika DNA -banden på gelén, som representerar de olika storlekarna på DNA -fragment.
2. Användningar i kloning:
* Verifiering av restriktionsmältning: Elektrofores hjälper till att säkerställa att begränsningsenzymerna framgångsrikt har klippt ditt DNA på rätt ställen och att vektorn har rätt begränsningsplatser för ligering.
* Analysera kloner: Efter ligering (anslutning till DNA -insatsen med vektorn) används elektrofores för att verifiera att ligering har varit framgångsrik. Du kan jämföra storleken på den rekombinanta DNA -molekylen med det ursprungliga DNA -fragmentet och vektorn.
* Screening Libraries: Elektrofores kan användas för att analysera DNA -insatserna i ett bibliotek med kloner, vilket hjälper till att identifiera kloner med önskad insats.
Sammanfattningsvis: Elektrofores är inte en del av själva kärnkloningsprocessen, men det är ett väsentligt analytiskt verktyg för att verifiera de olika stegen och säkerställa att kloningsexperimentet är framgångsrikt.
