Börja en kultur av Aspergillus niger. Denna svamp är mycket vanlig i naturen och specifika stammar har utvecklats som har en mycket hög produktionshastighet för citronsyra. Dessa stammar är tillgängliga varhelst vetenskap och jordbruksprodukter säljs.
Mata kulturen av A. niger enkelt socker. Detta kan vara sackaros (bordsocker) eller något medium som innehåller glukos. Källan är typiskt den billigaste källan till socker, såsom hydrolyserad majsstärkelse, majssirap eller melass. A. niger använder glukosen som livsmedel och producerar citronsyra och koldioxid (C02) som avfallsprodukter.
Filtrera formen ur kulturen när koncentrationen av citronsyra i kulturen tappar. Den återstående lösningen kommer att vara mycket hög i citronsyra.
Extrahera citronsyran. Tillsätt kalciumhydroxid [Ca (OH) 2] till lösningen. Den kommer att kombinera med citronsyran för att bilda kalciumcitrat Ca3 (C6H5O7) 2, ett salt som kommer att fälla ut ur lösningen. Följande ekvation visar denna reaktion: 3Ca (OH) 2 + 2C3H4 [COOH] 3OH -> Ca3 (C6H5O7) 2 + 3H2.
Regenerera citronsyran med svavelsyra. Följande ekvation visar denna reaktion: 3H2SO4 + Ca3 (C6H5O7) 2 -> 2C3H4 [COOH] 3OH + 3CaS04. Notera den extra produkten av kalciumsulfat (CaSO4).