Ferri Märkning av ett protein som kallas HIP1R i klatrinbelagda gropar. Märkning av HIP1R kan spåras med ljusmikroskopi och elektronmikroskopi. Placeringen av Ferritin visas med röda prickar i gropen. Kredit:University of Warwick
Forskare vid University of Warwick har skapat ett nytt sätt att se proteiner som finns inuti mänskliga celler.
Använder ferritin, ett stort proteinskal som våra celler använder för att lagra järn, forskarna har hittat en metod som de har kallat FerriTag som gör att ett elektronmikroskop (EM) kan se proteiner precis till skillnad från nuvarande metoder. Metoden gjorde det möjligt för forskarna att göra det möjligt för cellen att göra taggen själv för att undvika skador orsakade av att placera den från utsidan av cellen.
Deras papper FerriTag är en ny genetiskt kodad inducerbar tagg för korrelativ ljuselektronmikroskopi publiceras i tidskriften Naturkommunikation .
Teamet satte sig för att exakt lokalisera ett protein som finns i clathrin-belagda gropar. Dessa är 100 nm breda ingångspunkter som används av virus för att invadera celler och infektera dem. Använder FerriTag, teamet kunde se var proteinet finns i gropen och på insidan av cellens yta.
Teamet leddes av Dr. Stephen Royle Docent och Senior Cancer Research UK Fellow vid Warwick Medical School. Han sa:"Proteiner gör nästan alla jobb i celler som forskare vill studera. Vi kan lära oss mycket om hur proteiner fungerar genom att helt enkelt titta på dem i mikroskopet. Men vi måste veta deras exakta plats."
Även om ljusmikroskopi kan användas för att se proteiner röra sig runt är upplösningen låg, så att se ett proteins exakta plats är omöjligt. Detta kan övervinnas genom att använda elektronmikroskopi som ger en högre upplösning.
För att tillåta att proteiner kan ses av båda mikroskopen och korrelera dem, forskargruppen utvecklade en metod för att märka proteinerna så att de kan ses av båda typerna av utrustning.
Märkning används i stor utsträckning och flera taggar är tillgängliga men de har fastställt nackdelar; vissa är inte tillräckligt exakta, eller de fungerar inte på enstaka proteiner. För att övervinna detta skapade Dr. Royles laboratorium en ny tagg och smält den med ett fluorescerande protein. Dr. Royles team döpte den nya tekniken till FerriTag eftersom den är baserad på ferritin som kan ses med ett elektronmikroskop eftersom järn sprider elektroner.
Dr Royle sa att hans labb var tvungen att besegra ett annat hinder:"När Ferritin smälts samman med ett protein, vi slutar med en gröt. Så, vi ändrade Ferritin så att det kunde fästas till proteinet av intresse genom att använda ett läkemedel.
"Detta innebar att vi kunde sätta FerriTag på proteinet vi vill avbilda på några sekunder.
"Det coola med FerriTag är att den är genetiskt kodad. Det betyder att vi får cellen att göra taggen själv och vi behöver inte sätta in den utifrån vilket skulle skada cellen."