Kalciumjoner och EDTA genomgår en komplexbildningsreaktion för att bilda ett stabilt kalcium-EDTA-komplex. Denna reaktion kan representeras som:

Ca²⁺ + EDTA⁴⁻ ⇌ CaEDTA²⁻

Jämviktskonstanten för denna reaktion är mycket stor, vilket indikerar att reaktionen fortsätter nästan till fullbordan. Detta innebär att nästan alla kalciumjoner i en lösning kommer att komplexbindas med EDTA om tillräckligt med EDTA är närvarande.

Komplexbildningen av kalcium med EDTA är viktig i många biologiska och industriella tillämpningar. Till exempel används EDTA som ett kelatbildande medel för att avlägsna kalciumjoner från vatten, och det används också inom medicin för att behandla tillstånd som hyperkalcemi (höga nivåer av kalcium i blodet).