1. Välj rätt kromatografiteknik:
* tunnskiktskromatografi (TLC): Detta är en enkel och mångsidig teknik. Den separerar komponenter baserat på deras affinitet för den stationära fasen (vanligtvis en kiseldioxidplatta) och den mobila fasen (ett lösningsmedel). Medan du inte ser färger kan du visualisera de separerade komponenterna med:
* UV -ljus: Många ämnen absorberar UV -ljus, vilket gör dem synliga under en UV -lampa.
* Visualiseringsreagens: Specifika kemiska reagens kan reagera med de separerade föreningarna för att producera färgade fläckar.
* jodånga: Jodånga kan reagera med många organiska föreningar för att bilda bruna fläckar.
* gaskromatografi (GC): Denna teknik separerar flyktiga ämnen baserat på deras kokpunkter. Det är vanligtvis i kombination med en detektor som kan identifiera och kvantifiera komponenterna, till exempel en:
* flamjoniseringsdetektor (FID): Detta är känsligt för organiska föreningar.
* masspektrometer (MS): Detta ger detaljerad strukturell information om de separerade föreningarna.
* Högpresterande vätskekromatografi (HPLC): Denna kraftfulla teknik separerar komponenter baserat på deras polaritet och interaktioner med den stationära fasen. Det används ofta för att analysera komplexa blandningar och är vanligtvis kopplad till en detektor som:
* UV/VIS -detektor: Detekterar föreningar som absorberar UV eller synligt ljus.
* brytningsindexdetektor: Detekterar förändringar i brytningsindexet för eluerande lösningsmedel orsakat av närvaron av en förening.
2. Visualisering och identifiering:
* UV -ljus: Många föreningar, till och med färglösa, absorberar UV -ljus. Med hjälp av en UV -lampa kan du se fläckarna på separerade föreningar på en TLC -platta.
* Visualiseringsreagens: Olika reagens reagerar med specifika funktionella grupper i föreningar för att skapa färgade fläckar på en TLC -platta.
* detektorer: GC och HPLC använder detektorer för att signalera närvaron av komponenter när de eluerar från kolumnen.
3. Kvantitativ analys:
* Kalibreringsstandarder: Genom att köra kända mängder av ditt ämne tillsammans med ditt prov kan du använda kromatografieresultaten för att bestämma koncentrationen av ämnet i provet.
* Area under toppen: I GC och HPLC är området under toppen proportionellt mot ämnets mängd.
Exempel:
Föreställ dig att du vill analysera en blandning av sockerarter (glukos, fruktos och sackaros). Dessa sockerarter är färglösa, men du kan separera dem med TLC eller HPLC.
* TLC: När du har kört blandningen kan du använda ett reagens som anilin-fthalat (som reagerar med sockerarter för att producera färgade fläckar) för att visualisera de separerade komponenterna.
* hplc: Med hjälp av en UV/VIS -detektor kan du se topparna som motsvarar varje socker när de eluerar från kolonnen. Genom att jämföra toppområdena med kända standarder kan du bestämma de relativa mängderna för varje socker i blandningen.
Kom ihåg att välja rätt kromatografiteknik och visualiseringsmetod beror på det specifika substans du analyserar.
