Förstå grunderna
* natriumfosfatbuffert: Denna buffert tillverkas vanligtvis med användning av en blandning av monobasiskt natriumfosfat (NAH2PO4) och dibasiskt natriumfosfat (Na2HPO4). Dessa två komponenter fungerar som ett konjugatsyra-baspar, vilket gör att lösningen kan motstå förändringar i pH.
* ph 6,9: Det önskade pH i din buffert. Detta kommer att bestämma förhållandet mellan NAH2PO4 och Na2HPO4 som behövs.
* 0,006 M NaCl: Detta är helt enkelt en saltlösning som läggs till bufferten. Det påverkar inte direkt buffertens pH utan kan användas för specifika experimentella behov.
steg för att förbereda bufferten
1. Beräkna de nödvändiga massorna:
* Bestäm PKA: Den relevanta PKA för fosfatbuffert är 7.21 (PKA för H2PO4- / HPO42-jämvikten). Detta är nära ditt önskade pH, vilket gör det till ett bra val.
* Använd Henderson-Hasselbalch-ekvationen:
* ph =pka + log ([hpo42-] / [h2po4-])
* 6.9 =7.21 + log ([HPO42-] / [H2PO4-])
* Lös för förhållandet:[HPO42-] / [H2PO4-] =0,50
* Beräkna molariteten för varje fosfatkomponent:
* Total fosfatmolaritet =0,02 m
* [Na2HPO4] =0,02 m * (0,50 / 1,50) =0,0067 m (ungefär)
* [NAH2PO4] =0,02 m * (1,00 / 1,50) =0,0133 m (ungefär)
* Konvertera molariteter till gram:
* Du behöver molekylvikterna hos NAH2PO4 (119,98 g/mol) och Na2HPO4 (141,96 g/mol).
* Beräkna massan som behövs för varje komponent med följande formel:massa =(molaritet * Volym * Molekylvikt) / 1000
* Till exempel för NAH2PO4, om du vill göra 1 L buffert:
* Massa =(0,0133 mol/l * 1 l * 119,98 g/mol)/1000 =1,59 g
* Beräkna massan av Na2HPO4 på liknande sätt.
2. Lös salterna i vatten:
* Väg ut de beräknade mängderna NAH2PO4 och Na2HPO4.
* Lös dem i cirka 800 ml destillerat vatten.
* Tillsätt den beräknade massan av NaCl till lösningen och rör om för att lösa upp.
* Använd en magnetisk omrörare eller rörstång för att säkerställa grundlig blandning.
3. Justera pH (valfritt):
* Använd en pH -mätare för att kontrollera lösningens pH.
* Om pH inte är exakt 6,9 kan du justera det något genom att lägga till små mängder av antingen 1 M HCl (för att sänka pH) eller 1 M NaOH (för att höja pH). Tillsätt dessa lösningar droppvis under övervakning av pH med en mätare.
4. Ta med lösningen till slutvolymen:
* När pH är justerat, tillsätt försiktigt destillerat vatten för att föra lösningsvolymen till 1 L.
5. Kontrollera och butik:
* Kontrollera pH en gång till för att säkerställa att det är korrekt.
* Förvara din buffert vid rumstemperatur eller i kylskåp för längre förvaring.
Viktiga överväganden
* Kvalitet på vatten: Använd destillerat vatten av hög kvalitet för bästa resultat.
* noggrannhet: Väg sig exakt salterna för att säkerställa korrekt buffertkoncentration.
* pH -mätkalibrering: Kalibrera din pH -mätare ordentligt före användning för exakta mätningar.
* Säkerhet: Bär alltid lämpliga säkerhetsutrustningar (handskar, skyddsglasögon) vid hantering av kemikalier.
Denna procedur bör ge dig en 0,02 M natriumfosfatbuffertlösning vid pH 6,9 med 0,006 M NaCl. Kom ihåg att justera volymer och beräkningar om du behöver göra en annan volym buffert.
