Av bidragsgivare
Uppdaterad 30 augusti 2022
Att bemästra konsten att späda är viktigt för alla som arbetar inom kemi eller mikrobiologi. Noggranna utspädningar förbättrar laboratorieprecisionen, minskar variabiliteten och leder i slutändan till mer tillförlitliga data. Följande steg-för-steg-guide är grundad i laboratoriets bästa praxis och säkerhetsstandarder, vilket säkerställer att du utför varje utspädning med tillförsikt och noggrannhet.
För kemi eller analytiska utspädningar, använd mätglas som en mätpipett och en mätkolv. Inom mikrobiologi är serologiska pipetter och graderade cylindrar lämpliga för att överföra små volymer samtidigt som lösningen kan räknas.
Börja med en flytande stamlösning – antingen ett rent vätskeprov eller en lösning framställd av ett pulver eller en vätska som har spätts ut till en känd koncentration.
Mät den exakta volymen av lager med en mätpipett och överför den till en mätkolv som håller den önskade slutliga volymen. För en spädning på 1:100 pipetterar du 1,0 ml buljong i en 100 ml kolv och tillsätter 99 ml spädningsmedel för att nå totalt 100 ml.
Överför stamlösningen med en serologisk pipett till en bägare och tillsätt sedan spädningsmedlet med en graderad cylinder. För en 1:100 utspädning, tillsätt 1 ml lager till 100 ml spädningsmedel, vilket ger en slutlig volym på 101 ml.
Använd spädningsmedlet som anges för din metod. Inom mikrobiologi inkluderar vanliga val media, buffertar och sterilt vatten. Inom kemin kan spädningsmedel vara lösningsmedel, syror, baser eller avjoniserat vatten, beroende på analyten.
Snurra kolven halvvägs genom tillsatsen av spädningsmedel för att säkerställa homogenitet, fortsätt sedan tillsatsen tills den slutliga volymen uppnås.
För de sista millilitrarna, använd en droppare för att tillsätta spädningsmedel i enstaka droppar, för att säkerställa att den slutliga volymen mäts exakt.
Håll kolven eller bägaren i ögonhöjd och läs av den nedre kanten av menisken – den konkava kurvan som bildas av vätskeytan. Rikta in denna punkt med skalan på behållaren för exakt mätning.
Sätt i en magnetisk omrörarstav i spädningen och placera behållaren på en omrörarplatta, eller, om en omrörarplatta inte är tillgänglig, stoppa kolven, snurra och vänd den upp och ner flera gånger för att blanda.
När en stor slutlig volym krävs, utför serieutspädningar. För en spädning på 1:10 000, gör först en spädning på 1:100 (1 ml lager i 100 ml spädningsmedel). Överför sedan 1 mL av denna mellanlösning till ytterligare 100 mL spädningsmedel. Den kumulativa effekten ger en utspädning på 1:10 000.
Tillsätt alltid syra till vattnet, inte tvärtom, för att undvika exotermiska reaktioner. Börja med att tillsätta en liten volym vatten till kolven innan du för in syran, späd sedan till önskad volym.
Märk utspädningar tydligt, undvik att ersätta vätska som förloras under blandningen och tillsätt alltid syra till vattnet för att säkerställa säkerhet och noggrannhet.
Att tillsätta vatten till syra kan orsaka våldsamma reaktioner och allvarliga skador. Använd en pipettlampa, mun aldrig pipettera och tillsätt alltid syra i vattnet.
