Forskare använder serieutspädningar (en serie med 1:10 utspädningar) för att beräkna befolkningstätheten hos bakteriekulturer. När en droppe kultur som innehåller ett litet antal bakterier pläteras och inkuberas, kommer varje cell teoretiskt att vara tillräckligt långt bort från andra celler att den kommer att bilda sin egen koloni. (I själva verket kan vissa kolonier vara efterkommande av två närliggande celler, men detta är sällsynt i utspädda kulturer och så är antalet kolonier en mycket bra uppskattning av antalet celler som ursprungligen överfördes till plattan.) Eftersom befolkningstätheten är okänd, en mängd utspädningar måste användas för att sluta med en platta med ett lämpligt antal kolonier.

Serial dilutions

Märk de sex provrören (var och en innehåller 9 ml tillväxt media) som 1 till 6. Märk de sex agarplattorna som 1 till 6. Använd en pipett och sterila pipettspetsar (1) för att överföra 1 ml bakteriekultur till rör 1.

Blanda väl och överföra 1 ml från rör 1 i rör 2 med hjälp av pipetter och sterila 1 ml tips.

Upprepa steg 2 för de återstående rören, varje gång överföra 1 ml från det senast använda röret till nästa rör.

Använd en pipett och sterila 0,1 ml tips för att överföra 0,1 ml från rör 1 till en agarplatta. Flamma en L-formad glasstång och använd den för att sprida droppen jämnt runt plattan. Inkubera plattan i 48 timmar vid en lämplig temperatur för de bakterier som används. Olika typer av bakterier har olika optimala tillväxttemperaturer. Om du inte kan hitta den optimala tillväxttemperaturen med hjälp av referensmaterial, försök inkubera plattorna vid 25 och 37 grader.

Upprepa steg 4, varje gång överföring av vätska från ett annat provrör på motsvarande platta.
< h2> Befolkningsberäkningar

Observera de sex plattorna och välj den med 30 till 200 isolerade kolonier.

Multiplicera antalet kolonier på plattan med 10 för att beräkna antalet celler per ml av kulturen från det använda utspädningsröret.

Multiplicera numret från steg 2 med 10 ^ (plåtnummer) för att beräkna antalet celler per ml originalkultur. Värdet på 10 ^ (plåtnummer) är utspädningsfaktorn för den odling som användes för att inokulera den plåten.

Tips

Ta med alla nödvändiga näringsämnen i agarplattorna. Auxotrofa bakterier kräver vissa aminosyror utöver de grundläggande medieingredienserna. Olika auxotrofer har olika näringsbehov. Konsultera referensmaterial för att ta reda på vilka aminosyror, om några, dina bakterier behöver.

Vänta en sekund mellan att flamma glasstången och använda den, för att inte bränna bakterierna.

Varning

Använd alltid laboratoriehandskar vid hantering av bakterier.