Forskare använder flödescytometri för att skilja mellan olika typer av celler eller mikroskopiska organismer. Det är ett verktyg som används i många applikationer som medicinsk diagnostik eller rättsmedicinsk patologi. Medan denna experimentella teknik är ganska lätt att åstadkomma är analysen av den komplexa data som produceras av flödescytometern svårare på grund av de multipla experimentella faktorerna och /eller cytometerparametrarna. Som sådan är det rutin för cytometriska data att visualiseras och analyseras med hjälp av sofistikerade professionella program som CELLQuest eller FlowJo. Kännetecknande för flödescytometriteknik, maskiner och programvara är nödvändig för att förstå resultaten som produceras av dessa experiment.

Förstå flödescytometridata

Förklara experimentets syfte genom att fråga "Vad var Frågan eller hypotesen undersöks? " Detta kommer att krävas för att justera de röda resultaten till lämpligt format och inställningar för vidare analys med statistisk cytometri-programvara. Gör vad som behövs för att få data som visas med relevanta inställningar (t ex positiva celler, negativa grindar, fluorescensintensitet, cellpopulationer etc.).

Hitta grindar. Celler kan grupperas eller helt enkelt observeras grupperade tillsammans på en densitetsplot eller konturdiagram. Grupperna skiljer ofta beroende på deras identitet. Om en grupp fläckar mycket intensivt för en viss markör eller antikropp, dras slutsatsen att medlemmarna i den gruppen alla har identiteten för den specifika celltypen, vilken uttrycker den markören. Det är vanligt att hitta celler som är positiva för mer än en av dessa markörer, och dessa celler är vanligtvis en mellanliggande och betecknad som "dubbel-positiv".

Titta på scattergraphs. Det sätt som cellerna i cellerna sprids ut i en scatterplot är en indikation på cellernas storlek. Celler med mycket stora eller höga scatters är typiskt stora celler; De kan dock vara stora bara för att de innehåller en hög andel cytoplasma, eller de kan vara höga eftersom de har en mycket stor kärna. Beroende på vilken biologi som undersöks kommer det givetvis att variera mycket mellan experiment.

Titta på siffror. Justera diagrammen för att visa olika parametrar på en axel (vanligtvis X-axeln) medan du håller räkningarna på Y-axeln. Detta indikerar andelen av provpopulationen som är positiv för den specifika parametern, eftersom en topp normalt kommer att observeras i ett positivt färgat prov, vilket kommer att vara frånvarande från det negativa kontrollprovet.

Titta på multipel- parameterhistogram. Genom att justera X-axeln och Y-axeln till var och en representerar en annan parameter som undersöktes under experimentet, är det möjligt att få en djupare förståelse för provets egenskaper. Genom att exempelvis ställa in X-axeln till röd fluorescens och Y-axeln till grön fluorescens kan kvadrantstil-grindar beräknas för att provet ska visa fyra regioner i en kvadrant där celler finns närvarande och färgas för antingen röd eller grön fluorescens, båda färgerna eller ingen alls. Detta gör att ett heterogent prov kan delas upp i dess komponentdelar och eventuella överlappande enheter som ska visualiseras såväl som kvantifieras.