Ett av de klassiska sätten att bestämma koncentrationen av mikrober i ett prov är att späda provet, odla mikroberna på plattor och räkna kolonierna. De pläterade mikroberna växer från en kolonidannande enhet bestående av en eller flera celler i en synlig koloni som kan ses och räknas. Bakterier är den vanligaste mikroben att bedöma med användning av platta. Kolonifält används för att detektera och räkna mikrober i mark, vatten och mat. Protokoll för att räkna kolonier betonar ett noggrant och metodiskt tillvägagångssätt.

Utspädning av prov, plätering och inkubation

Om du helt enkelt smeder ett mikrobiprov på en agarplatta, så ser du så många kolonibildande enheter som de enskilda kolonierna kommer att blanda samman, vilket gör dem omöjliga att räkna. För att lösa detta problem, blanda provet i ett flytande medium, ta en liten mängd av den blandningen och späd den vidare. Upprepa denna process sex till 10 gånger. Sprid den slutliga utspädningen på en agarplatta och inkubera den i fyra till sju dagar innan du räknar kolonierna.

Manuell räkning

Det primära tricket i att räkna kolonier är att räkna varje kolonipunkt en gång. Ett tillvägagångssätt är att ställa Petri-skålen på en rutnätbakgrund och räkna kolonierna i varje rutcell, som rör sig i ett metodiskt mönster genom alla celler. Att märka räknade kolonier på baksidan av Petriskålen kan också vara ett bra tillvägagångssätt. Generellt måste du räkna minst tre tallrikar; Använd endast plattor som innehåller 30 till 300 kolonier för att göra robusta inferenser, föreslår Microbiology Network, ett företag som tillhandahåller konsulttjänster till laboratorier och tillverkare. Plattor med kolonier som är för många för att räkna eller med för få kolonier måste ompläteras från en ny utspädning.

Automatiserad räkning

Människofel ökar tiden som är inblandad i att räkna kolonier manuellt . För att förbättra både noggrannhet och effektivitet, placera Petriskålen i en automatisk kolonnräknare. Automatiserade koloniräknare tar en bild av skålen, separerar kolonierna från bakgrunden och använder sedan en algoritm för att räkna kolonierna på plattan. Algoritmerna kan ha svårigheter att differentiera kolonier när två eller flera kolonier rör vid kanterna, så det här är ett område för pågående mjukvaruutveckling.

Att räkna mer komplicerat

Noggrannheten att beräkna mikrobe densitet från kolonifält har vissa begränsningar. Kolonidannande enheter kan vara en enda cell, en kedja av celler eller en hel grupp av celler. Antagandet är att en koloni representerar en cell, så koncentrationer beräknade från kolonnantal kan vara låga. Olika mikrober behöver olika tillväxtförhållanden, och kolonierna på plattan representerar bara de mikrober som trivs på det tillväxtmediet under dessa inkubationsförhållanden. Dessutom registrerar koloniträning inte döda celler, en viktig faktor när du behöver koncentrationen av celler i det ursprungliga provet.