Det främsta skälet till att du fläckar ett prov innan du lägger det under mikroskopet är att få en bättre titt på det, men färgning gör mycket mer än bara markera cellernas konturer. Vissa fläckar kan tränga igenom cellväggar och belysa cellkomponenter, och detta kan hjälpa forskare att visualisera metaboliska processer. Fläckar hjälper också till att skilja mellan levande celler och döda celler. Dessutom gör färgning det möjligt för forskare att räkna antalet celler av en viss typ inom en viss biomassa. Tjugo eller flera olika typer av fläckar finns, och var och en har sitt syfte.
TL; DR (för lång; läste inte)
Huvudsyftet med färgning är att markera celler och delar av celler. Över 20 olika typer av fläckar finns, och vilken typ av fläck du använder beror på vad du letar efter.
typer av fläckar <<> Valet av fläck beror på vad du letar efter. Inte alla fläckar är lämpliga för levande celler, men de som inkluderar Bismarckbrun, toluenröd, Nylblå och Nilenröd och vissa fluorescerande medel som används för att belysa DNA. Vissa fläckar belyser sporer, andra upptäcker lipider och proteiner och vissa ändrar färg i närvaro av stärkelse. Syftet med undersökningen bestämmer den bästa fläcken att använda. Till exempel skulle en läkare som utför en PAP-smet använda Eosin Y. Det är ett surt fluorescerande färgämne som blir rött när det kommer i kontakt med röda blodkroppar, cytoplasma och cellmembran. Det används också för att testa blodmärg.
I vissa fall kan en utredare använda mer än en fläck. Till exempel är hematoxylin en fläck som gör cellkärnorna blå. När den används tillsammans med eosin, som gör de andra delarna av cellen röd eller rosa, ger den en starkare kontrast och gör kärnorna lättare att differentiera. PAP-utstryk och blodmärgsprover är lättare att undersöka när dessa två fläckar används tillsammans.
Gram's Stain: Sjukhusarbetare använder Grams fläck för att identifiera skadliga bakterier. Detta är faktiskt en serie färgämnen som har olika effekter på olika typer av bakterier och ger läkarna ett viktigt diagnostiskt verktyg. Grams fläck är en tredelad process. I det första läggs Huckers kristallviolett till, vilket färgar alla bakterier en enhetlig violet färg. I nästa steg läggs jodfärg till, vilket får färgen att hålla fast vid Gram-positiva celler, som främst är Staphylococcus och Streptococcus. Fläcken tvättas bort, vilket lämnar de Gram-positiva cellerna med en distinkt violett färg; sedan introduceras en tredje fläck, Safranine O, för att öka kontrasten mellan de Gram-negativa bakterierna och resten av materialet i objektglaset.
Färgningsförfarande
När du förbereder ett prov på en bild, du kan torrmontera eller våtmontera den, du kan skära den i en tunn sektion eller så kan du smeta den. När du använder en fläck, är den vanliga proceduren att våtmontera provet, vilket innebär att placera en droppe vatten på objektglaset, sätt provet i vattnet och täck det med en täckglas. Du applicerar sedan fläcken på ett hörn av bilden med en dropper och låter den dras mot provet genom kapillärverkan. Det hjälper till att lägga en pappershandduk på motsatt sida av bilden för att locka vattnet. När fläcken har spridit sig över hela bilden är provet redo för undersökning.
