Av Chris Deziel Uppdaterad 24 mars 2022
toeytoey2530/iStock/GettyImages
Att färga ett prov före mikroskopisk undersökning förbättrar främst synligheten, men dess fördelar sträcker sig långt bortom cellgränserna.
Vissa färgämnen genomsyrar cellväggarna, belyser inre strukturer och gör det möjligt för forskare att observera metabolisk aktivitet på plats.
Dessutom skiljer fläckar mellan viabla och icke-viabla celler.
Dessutom underlättar färgning exakt räkning av specifika cellpopulationer inom en given biomassa.
Över 20 distinkta färgningsreagenser finns tillgängliga, var och en skräddarsydd för ett visst diagnostiskt eller forskningsmål.
Färgning accentuerar cellulära strukturer; val av reagens hänger på det analytiska målet.
Valet av färgämne beror på den specifika egenskap du vill visualisera. Alla fläckar är inte kompatibla med levande celler, men de som är – inklusive Bismarckbrun, toluenröd, Nileblå, Nileröd och DNA-bindande fluorescerande ämnen – används ofta inom cytologi och histologi.
Vissa fläckar riktar sig mot sporer, andra framhäver lipider eller proteiner, medan några ändrar färg i närvaro av stärkelse. Till exempel skulle en läkare som utför ett PAP-utstryk applicera EosinY, ett surt fluorescerande färgämne som blir klarrött mot röda blodkroppar, cytoplasma och cellmembran. Eosin Y används också rutinmässigt vid analys av benmärgsaspirat.
I många fall är en enda fläck otillräcklig. Hematoxylin, till exempel, färgar kärnor blå, och när det paras ihop med eosin producerar det en kontrasterande röd eller rosa bakgrund som gör att kärnorna sticker ut skarpt. Den kombinerade hematoxylin-eosin (H&E) färgen är en stapelvara i patologi för att undersöka vävnadsarkitektur.
Grams färgningsprocedur är en hörnsten i klinisk mikrobiologi, vilket möjliggör snabb identifiering av bakteriella patogener. Tekniken använder en serie färgämnen som olika färgar grampositiva och gramnegativa organismer.
Först appliceras kristallviolett, vilket färgar alla celler en enhetlig viol. Därefter fungerar jod som ett betsmedel och låser in färgämnet i de tjocka peptidoglykanskikten av grampositiva bakterier – typiskt Staphylococcus och Streptococcus – så att violen finns kvar efter avfärgning. Slutligen ger en motfärgning som SafranineO en röd eller rosa nyans till gramnegativa celler, vilket skapar en tydlig kontrast mellan de två grupperna.
Provberedning kan innebära torrmontering, våtmontering, sektionering eller smetning. För de flesta färgningsprotokoll är en våtmontering att föredra:placera en droppe destillerat vatten på objektglaset, placera provet och täck med ett täckglas. Applicera en droppe av färgningslösningen i ett hörn; kapillärverkan drar färgen över provet. Att placera en pappershandduk på objektglasets motsatta sida hjälper till att suga upp överflödig vätska, vilket säkerställer en jämn spridning. När fläcken har penetrerat helt är objektglaset redo för mikroskopisk utvärdering.
