Proteashämmare är enzymer som inhiberar proteasernas verkan, vilket är vissa enzymer som dödar proteiner i cellerna. Det finns flera proteaser som riktar sig mot olika proteiner. För att bevara funktionaliteten av proteiner efter celllysen används därför en kombination eller en cocktail av proteashämmare. Dessa är tillgängliga i lösning, tablett eller pulverform.

Proteashämmare

Gör aprotinin, leupeptin och pepstatin vid lagerkoncentrationer av 100uM (MicroMolar).

Aprotinin finns i lösningsform vid en stamkoncentration av 100 mM. För att göra 1 ml (milliliter) av 100uM, lösa 1ul (mikroliter) i 999ul av 1X PBS (Physiological Buffer Solution).

Leupeptin är tillgängligt som ett pulver. Molekylvikten av Leupeptin är 475,6. Lös 100ug (mikrogram) pulver i 2 ml vatten för att göra lagerkoncentrationen på 100uM.

För att göra Pepstatin, lösa upp 100ug pepstatinpulver i 1,45 ml vatten för att göra en beståndsdelskoncentration på 100uM.

Alla dessa kan antingen blandas eller lagras individuellt på minus 80 grader Celsius.

Gör PMSF (fenylmetylsulfonylfluorid) i lager 100mM. PMSF kommer i pulverformen. Molekylvikten för PMSF är 174,19. Lös 10 mg PMSF i 572 μl 100 procent etanol och förvara vid 4 grader Celsius. Det är ljuskänsligt och ska förvaras i mörkt.

Det läggs till lysisbufferten precis före användning.

Blanda proteaserna ihop vid nödvändiga koncentrationer. Generellt spädas de med en faktor 100 för användning.

Tips

Kommersiellt tillgängliga cocktailer av proteashämmare sparar tid och är lätta att använda. De kommer i form av tabletter eller lösningar.