Enterobacter aerogenes och andra species av Enterobacteriaceae är lätta att identifiera med hjälp av API-20E test kit. Denna sats, tillverkad av bioMeriuex Inc., innehåller 20 minrör eller brunnar för testet. Testet består i att inokulera en ren bakteriesuspension i testbrunnarna och läsa de färgreaktioner som uppstår. Identifiering bygger på att omvandla resultaten av dessa färgreaktioner till en siffrigs kod känd som Analytisk Profil Index. Att matcha den här koden med tillverkarens databas ger en identifiering av organismen.
Isolera organismen du vill identifiera på ett odlingsmedium som är specifikt för Enterobacteriaceae. Använd API 20E testkit endast med rena kulturer och inte direkt på blandade odlingsprover.
Öppna en ampull innehållande 5 ml natriumklorid 0,85% medium. Ta bort en enda koloni från en 18 till 24-timmars isoleringsplatta med en pipett och tillsätt den i ampullen. Blanda för att erhålla en homogen suspension. Använd denna upphängning så snart du har klargjort det.
Ställ in ett inkubationsbox som består av honungskammarbrunnar i ett bricka försedd med lock. Öppna lådan och sätt 5 ml av demineraliserat eller destillerat vatten i brunnsbrunnarna. Packa upp den remsa som finns i API 20E-testkitet och placera den i inkubationsboxen.
Fyll röret och kuppen i brunnarna märkta "GEL," "VP" och "CIT" med suspensionen har förberett. I de återstående brunnen fyller du bakteriesuspensionen i röret men inte på kupolen. Lägg till mineralolja i brunnarna märkta "ADH", "ODC", "LDC", "URE" och "H2S" för att skapa en anaerob miljö.
Täck inkubationsboxen med locket och inkubera vid en temperatur mellan 34 och 38 grader i 18-24 timmar.
Observera brunnarna och notera reaktionerna på resultatbladet. Under förutsättning att minst tre tester är positiva, fortsätt till färgreaktionerna med hjälp av de kemiska testlösningarna eller reagenserna som följde med satsen. Lägg till en droppe TDA-reagens i brunnen märkt "TDA" och en droppe vardera av VP1- och VP2-reagens till väl märkt "VP". Om färre än tre tester var positiva, inkubera remsorna ytterligare 24 timmar innan de tillsätts.
Observera de färgförändringar som produceras i brunnarna. En rödbrun färg i TDA indikerar en positiv reaktion. Vänta i 10 minuter efter tillsats av reagens från satsen till VP1 och VP2. Tänk på att en röd eller rosa färg är positiv och en blekrosa färg som uppträder efter 10 minuter som negativ.
Lägg en enstaka droppe JAMES reagens från testkit till den väl märkta "IND". Tänk på en rosa färg i hela kupolen som en positiv reaktion.
Utför oxidas testet enligt tillverkarens tillverkning och registrera dess resultat tillsammans med resultaten från de 20 senaste testerna.
Använd läsningstabellen som levereras med testkit för att ange värden för de reaktioner som observerats i vart och ett av testbrunnarna. Lägg till dessa värden som föreskrivna för att få det siffriga profilnumret.
Mata in det sju siffriga profillnumret i tillverkarens databas via en touchtone-telefon. Vänta att få den identifiering som tillhandahålls av databasen. Om profilnumret inte ger specifika resultat, utför de kompletterande testerna som anges av tillverkarens tillverkare.
