Högpresterande vätskekromatografi (HPLC) är en laboratorieteknik som används för att separera och identifiera föreningar. Det är en typ av kolonnkromatografi som förlitar sig på olika polariteter av föreningar i en lösning för att separera dem. HPLC skiljer sig från standard kolonnkromatografi eftersom den använder tryck för att tvinga lösningen genom kolonnen snabbare och därför ger snabbare, och ibland mer exakta, resultat. Målet är att separera föreningar i kolonnen och låta dem gå ut separat.
Coelution

På grund av HPLC: s hastighet och det beror på olika polariteter hos föreningar kan två föreningar med liknande struktur och polariteter komma ut kromatografiapparater samtidigt eller nästan samtidigt. Detta kallas coelution. Coelution gör att man bestämmer exakt vilken del av blandningen som elueras vid vilken tidpunkt det är svårt. Blandningarna som tvingas genom kolonnen har kemikalier som binder med olika styrkor till pärlorna. Bindningens styrka, som beror på likheten i polaritet, avgör hur länge kemikalien kommer att binda till pärlan innan den släpps. Vissa föreningar binder så starkt att de i huvudsak aldrig frigörs från pärlorna i kolonnen och mäts aldrig i lösningen som kommer ut från kolonnen. separering och implementera sedan denna analys för att separera enskilda föreningar från en lösning. Men detta resulterar vanligtvis i flera lösningar som också måste genomgå förfaranden, vilket leder till en exponentiell ökning av komplexiteten. Även om HPLC ofta kan förenkla och påskynda denna process kan kostnaderna för att utveckla en HPLC-apparat bli enorma. Att utveckla en HPLC-apparat, även om det är mycket effektivare, är mycket dyrare än att utveckla andra analyser för att separera föreningar. Detta gör det inte ekonomiskt hållbart för många små privatägda laboratorier.
Komplexitet

HPLC används inte bara för att separera enkla föreningar, det används också för att isolera specifika proteiner från en cellblandning. I detta fall beläggs pärlorna i kolonnen vanligtvis med en antikropp specifik för det protein du behöver samla in. Proteinerna binder antikropparna och den återstående lösningen förs genom kolonnen, sedan frisätts proteinerna med hjälp av en annan lösning och samlas upp. Detta kräver en mycket skicklig tekniker för att övervaka kolumnen hela tiden och se till att processen körs exakt som planerat.