1. Celllys:

- Samla ditt material som inkluderar ett prov av celler (växt- eller djurvävnad), salt, flytande diskmedel och en DNA-extraktionsbuffert (TE-buffert eller Tris-EDTA-buffert).

- Lägg en liten bit av vävnadsprovet i en mortel och mortelstöt eller en liten behållare med lock.

- Tillsätt en liten mängd salt till provet (cirka 1/4 tesked per 1 gram vävnad).

- Tillsätt några droppar flytande diskmedel till blandningen och mal eller mosa vävnaden ordentligt.

- Det här steget bryter upp cellmembranen och frigör DNA.

2. Proteinfällning:

- Överför lysatet (blandningen av trasiga celler) till ett centrifugrör.

- Tillsätt en volym kall DNA-extraktionsbuffert som är lika med volymen av lysatet. Blanda noggrant.

- DNA-extraktionsbufferten innehåller rengöringsmedel som hjälper till att lösa upp cellmembran och proteiner, samt en saltlösning som hjälper till att fälla ut proteiner (inklusive histoner associerade med DNA) ur lösningen.

– Proteinerna bildar en klump och separeras från DNA:t.

3. DNA-utfällning:

- Centrifugera blandningen i några minuter vid hög hastighet (cirka 12 000–15 000 rpm).

- Detta kommer att få de utfällda proteinerna och cellrester att bilda en pellet i botten av röret, vilket lämnar DNA:t kvar i supernatanten (vätskan ovanför pelleten).

4. DNA-insamling:

- Ta försiktigt bort supernatanten, som innehåller DNA:t, till ett nytt rör.

- Undvik att överföra någon av pelleten, eftersom den mest innehåller protein och cellrester.

– DNA:t finns nu i en relativt ren form, fri från de flesta cellkomponenter och proteiner.

Etanolextraktion:

1. DNA-utfällning:

- Till röret som innehåller DNA-lösningen från salttvålsextraktionen, tillsätt en lika stor volym kall 95%-100% etanol.

- Blanda försiktigt genom att vända på röret flera gånger. Vortexa inte, eftersom detta kan klippa DNA:t.

- DNA:t kommer att börja fällas ut ur lösningen som en vit, trådig massa.

2. DNA-tvätt:

- Centrifugera blandningen i några minuter vid hög hastighet (cirka 12 000–15 000 rpm).

- DNA:t kommer att bilda en pellet i botten av röret. avlägsna försiktigt supernatanten (etanollösningen) utan att störa pelleten.

3. DNA-torkning:

- Skölj försiktigt DNA-pelleten med kall 70 % etanol för att avlägsna eventuella restsalter.

- Centrifugera kort för att samla upp DNA i botten av röret.

- Ta försiktigt bort etanolen utan att störa pelleten.

- Låt DNA-pelletsen lufttorka i några minuter.

4. DNA-återsuspension:

- Tillsätt en liten mängd DNA-extraktionsbuffert (TE-buffert eller Tris-EDTA-buffert) till röret som innehåller DNA-pelleten.

- Använd en mikropipett för att försiktigt återsuspendera DNA:t genom att pipettera upp och ner tills det är helt upplöst.

– DNA:t är nu redo för vidare analys, som PCR, gelelektrofores, eller andra molekylärbiologiska tekniker.

Båda metoderna syftar till att störa cellmembranet, frigöra DNA och sedan separera DNA från andra cellulära komponenter genom utfällning och centrifugering. De ger ett enkelt och kostnadseffektivt sätt att extrahera DNA för grundläggande experiment och utbildningsändamål.