Material:
* Tris Base (Tris (hydroximetyl) Aminometan)
* 1 M HCl -lösning
* Avjoniserat vatten
* pH -mätare eller pH -indikatorpapper
* Graderad cylinder
* Bägare
* Omrörningsstång
Förfarande:
1. Beräkna mängden Tris Base:
* Tris har en molekylvikt på 121,14 g/mol.
* För att förbereda 1 liter 0,1 m Tris -lösning behöver du:
* 0,1 mol/l * 121,14 g/mol =12,114 g Tris -bas
* Justera mängden proportionellt om du behöver en annan volym buffert.
2. Lös Tris -basen:
* Väg ut den beräknade mängden Tris-bas och lös upp den i cirka 800 ml avjoniserat vatten i en 1-liters bägare.
* Rör noggrant för att säkerställa fullständig upplösning.
3. Justera pH:
* med en pH -mätare: Tillsätt långsamt 1 M HCl -lösning till Tris -lösningen medan du kontinuerligt övervakar pH med användning av en pH -mätare. Rör om efter varje tillägg.
* med pH -indikatorpapper: Tillsätt små mängder HCl tills det önskade pH på 8,0 har uppnåtts, vilket indikeras av pH -papperet.
4. Gör upp till slutvolym:
* När det önskade pH har uppnåtts, tillsätt avjoniserat vatten för att föra den slutliga volymen till 1 liter.
5. Kontrollera och justera pH:
* Kontrollera pH med en pH -mätare eller indikatorpapper och gör eventuella mindre justeringar med HCl eller en utspädd NaOH -lösning, om det behövs.
Viktiga anteckningar:
* Säkerhet: Tris -basen är milt irriterande för huden och ögonen. Använd lämpliga säkerhetsglasögon och handskar under hanteringen.
* pH -mätkalibrering: Se till att din pH -mätare är korrekt kalibrerad före användning.
* Temperatureffekter: PH för en Tris -buffert är något temperaturberoende. Var medveten om detta om du behöver använda bufferten vid temperaturer väsentligt skiljer sig från kalibreringstemperaturen.
* lagring: Förvara den beredda bufferten vid rumstemperatur eller i kylskåp för utökad lagring.
Ytterligare tips:
* pHjustering: Det är vanligtvis lättare att justera pH -pH genom att lägga till HCl än att höja det genom att tillsätta NaOH.
* Precision: En pH -mätare ger dig en mer exakt avläsning än pH -papper.
* Flera buffertar: Om du behöver förbereda flera buffertar är det mer effektivt att göra en koncentrerad stamlösning av TRIS och utspäda den efter behov.
Låt mig veta om du har fler frågor.
