Kromatografi är en hörnstensanalysteknik som separerar komponenterna i en blandning. Det nyckelmått som kvantifierar hur långt en förening färdas under denna process är retentionsfaktorn, vanligen förkortad som Rf .
Alla kromatografiska metoder förlitar sig på en stationär fas som förblir fast och en mobil fas som rör sig över det. I papperskromatografi är själva papperet den stationära fasen medan lösningsmedlet fungerar som den mobila fasen.
Till att börja med placeras en liten prick av provet nära den nedre kanten av papperet. Papperet placeras sedan i en grund bägare som innehåller lösningsmedlet, vilket säkerställer att lösningsmedlet inte nedsänker provfläcken. Kapillärverkan drar lösningsmedlet uppåt och bär med sig alla komponenter som har högre affinitet för den mobila fasen.
När lösningsmedelsfronten väl har avancerat framställs ett kromatogram. Den här bilden avslöjar fördelningen av provets beståndsdelar och kan användas för att identifiera okända ämnen.
När kromatogram utvecklas under identiska förhållanden är avståndet ett givet ämne färdas reproducerbart. retentionsfaktorn beräknas som:
Rf =(avstånd som förflyttas av ämnet) ÷ (avstånd som förflyttas av lösningsmedelsfronten)
Det resulterande Rf-värdet är en karakteristisk egenskap hos föreningen för det specifika lösningsmedelssystem och stationära fas som används.
Anta att du har tre rena standarder och en okänd blandning. Genom att köra varje standard på samma kromatogram upprättar du baslinje-Rf-värden för jämförelse.
I detta exempel färdades lösningsmedelsfronten 5,7 cm. Standarderna rörde sig enligt följande:
Efter att ha analyserat den okända blandningen, observerar du två distinkta fläckar. Lösningsmedelsfronten i denna körning rörde sig 4,5 cm, och fläckarna rörde sig 2,2 cm respektive 3,9 cm. Att beräkna deras Rf-värden ger:
Att jämföra dessa värden med standarderna tyder på att Komponent1 matchar Standard3 (Rf≈0,51) och Komponent2 matchar Standard2 (Rf≈0,84).
Genom att utnyttja konsekventa Rf-värden kan du med säkerhet identifiera beståndsdelarna i komplexa blandningar, en praxis som används allmänt i laboratorier över hela världen.
