Gelelektrofores är en av huvudmetoderna som används i molekylärbiologi för analys av DNA. Denna metod innefattar migrering av fragment av DNA genom en gel, där de separeras på grundval av storlek eller form. Men även en vetenskapligt ljudmetod som gelelektrofores är inte immun mot fel.
Hur elektrofores fungerar
Gelelektrofores innebär användning av en gel som vanligtvis är tillverkad av polymerer som agaros. Gelén är nedsänkt i en buffertlösning som leder ett elektriskt fält. DNA-provet av intresse fragmenteras först med användning av restriktionsenzymer och injiceras sedan i gelén. När det elektriska fältet tänds migrerar DNA-fragmenten i gelén mot den positiva elektroden. Om DNA-fragmenten har olika storlekar, kommer migrationstiderna att vara olika för varje storleksfragment. Fragmenten visualiseras därefter med hjälp av ett färgämne eller autoradiografi och är synliga som band i gelén.
Förorening av provet
Den stora tillämpningen av elektrofores är som ett verktyg för analys av DNA i molekylärbiologi, men används också i rättsmedicin som ett sätt att identifiera prover från en brottsplats. Det är viktigt att felkällor i denna teknik minimeras för att få exakta resultat. En felkälla är kontaminering av DNA-provet. Om det finns främmande DNA i provet, kommer gelén att ha fler band än vad som hittades i en gel som innehåller endast det renade provet.
Problem med gelén, strömmen och bufferten
The Koncentrationen av gelén måste också vara korrekt för att undvika fel. Om koncentrationen är för hög eller för låg, kommer fragmenten att migrera antingen för långsamt eller för snabbt. Detta leder till fel i att lösa de olika banden. Under elektroforesningen måste man se till att spänningen är stabil. Eventuella fluktuationer i spänningen kommer att resultera i ostadig migrering av DNA-fragment, vilket leder till fel vid läsning av banden. Buffertlösningen måste också ha den korrekta kompositionen, eftersom en buffert med fel pH eller jonkoncentration kommer att förändra formen av DNA-fragmenten och även ändra deras migrationstider.
Korrekt visualisering
Viktigast, gelén måste visualiseras ordentligt. Om koncentrationen av färgämnet eller radioaktiv sond som används för att visualisera proverna är för hög, blir den resulterande bilden väldigt rörig, eftersom resterande fragment också kommer att visualiseras. Om gelkoncentrationen är för låg blir det ingen visualisering. När de korrekta processerna har följts under alla steg kommer gelelektrofores att ge resultat som är korrekta och kan användas med stor självförtroende. Liksom vid alla vetenskapliga förfaranden kan gelelektrofores vara benägen för fel, men dessa kan minimeras med korrekt förberedelse och hantering.
