* aminosyror har joniserbara grupper: Varje aminosyra har minst två joniserbara grupper:en karboxylgrupp (-COOH) och en aminogrupp (-NH2). Dessa grupper kan få eller förlora protoner (H+) beroende på lösningens pH.
* isoelektrisk punkt (PI): Varje aminosyra har ett specifikt pH -värde som kallas den isoelektriska punkten (PI) där dess nettoladdning är noll. Vid detta pH finns aminosyran som en zwitterion (både positiva och negativa laddningar balanserade).
* migration i ett elektriskt fält: När de utsätts för ett elektriskt fält under elektrofores kommer aminosyror med en nettos positiv laddning att migrera mot den negativa elektroden (katod), medan de med en netto negativ laddning kommer att migrera mot den positiva elektroden (anod).
* ph -effekt på laddning:
* ph under PI: Aminosyran kommer att protoneras och ha en nettopositiv laddning.
* ph ovanför pi: Aminosyran kommer att avprotoneras och bära en negativ laddning.
* ph vid pi: Aminosyran har ingen nettoladdning och kommer inte att migrera.
Därför påverkar pH för buffertlösningen som används vid elektrofores direkt separationen av aminosyror:
* Optimal separering: Att använda ett pH något annorlunda än PI för aminosyrorna säkerställer att de har en nettoladdning och kommer att migrera i olika hastigheter, vilket leder till effektiv separering.
* Dålig separation: Om pH är för nära PI för en aminosyra, kommer den att ha en mycket låg nettoladdning och kommer att migrera långsamt, vilket resulterar i dålig upplösning.
* ingen separation: Om pH är exakt vid PI för en aminosyra kommer den inte att ha någon nettoladdning och kommer inte att migrera alls.
Sammanfattningsvis är pH en kritisk faktor i elektrofores eftersom den bestämmer laddningstillståndet för aminosyror, påverkar deras migration i det elektriska fältet och i slutändan dikterar separationseffektiviteten.
