1. Antibiotikaresistensmarkörer:
* Princip: Denna metod förlitar sig på att infoga en antibiotikaresistensgen tillsammans med den önskade genen i vektorn. Celler som framgångsrikt tar upp den rekombinanta vektorn kommer också att få resistens mot det specifika antibiotikumet.
* Förfarande: Celler odlas på media som innehåller antibiotikumet. Endast celler som har tagit upp den rekombinanta vektorn och uttrycker resistensgenen kommer att överleva och bilda kolonier.
* Exempel: Den vanligt använda ampicillinresistensgenen (AMPR) gör det möjligt för bakterier att överleva i närvaro av ampicillin.
2. Reportergener:
* Princip: Reportergener kodar proteiner som producerar en detekterbar signal, vilket möjliggör enkel identifiering av celler som innehåller det rekombinanta DNA.
* Förfarande: Reportergener är ofta kopplade till den önskade genen, så expression av reportergenen indikerar framgångsrik införande av det rekombinanta DNA.
* Exempel:
* lacz gen: Kodar beta-galaktosidas, som bryter ner ett substrat (X-GAL) för att producera en blå färg.
* GFP -gen: Kodar grönt fluorescerande protein, vilket gör att celler lyser gröna under UV -ljus.
3. Färgval:
* Princip: Denna metod använder ett genetiskt system där närvaron av det rekombinanta DNA förändrar cellernas färg.
* Förfarande: Celler som innehåller det rekombinanta DNA visar en annan färg jämfört med celler utan det.
* Exempel: Den blåvit screeningsmetoden använder en vektor med LacZ-genen som störs av införingsstället för det rekombinanta DNA. Celler med det rekombinanta DNA kommer att producera vita kolonier, medan celler utan det kommer att producera blå kolonier.
4. Komplement:
* Princip: Denna metod används när den önskade genen krävs för att cellen ska överleva eller producera en specifik produkt.
* Förfarande: Celler som saknar en funktionell gen transformeras med den rekombinanta vektorn som innehåller genen. Endast celler med den funktionella genen kommer att överleva eller producera den önskade produkten.
* Exempel: En stam av bakterier som saknar ett specifikt enzym kan transformeras med en vektor som innehåller genen som kodar för enzymet. Endast de transformerade bakterierna kommer att kunna överleva och växa.
5. Fluorescensaktiverad cellsortering (FACS):
* Princip: FACS använder fluorescensmärkning för att identifiera och sortera celler baserade på specifika egenskaper.
* Förfarande: Celler som uttrycker den önskade genen (kopplad till en fluorescerande markör) sorteras från resten baserat på deras fluorescensegenskaper.
* Fördelar: Screening med hög genomströmning, exakt separering och effektiv sortering av celler.
6. PCR -screening:
* Princip: PCR kan användas för att förstärka en specifik DNA -sekvens, vilket bekräftar närvaron av det rekombinanta DNA.
* Förfarande: DNA extraheras från celler och amplifieras med användning av primrar specifika för den insatta genen. Närvaron av den förstärkta produkten indikerar framgångsrik införande.
Valet av urvalsmetod beror på det specifika experimentet, vektorn som används och det önskade resultatet.
