Vid titreringen av natriumtiosulfat med jod sker färgförändringen på grund av reaktionen mellan dessa två ämnen. Slutpunkten för titreringen uppnås när allt tiosulfat har reagerat med jodet. Vid denna tidpunkt kommer lösningen att vara färglös. Men om mer jod tillsätts efter att ändpunkten har nåtts kommer lösningen att bli blå på grund av bildningen av trijodidjoner.

Reaktionen mellan tiosulfat och jod kan representeras av följande ekvation:

2S2O3^2- + I2 → S4O6^2- + 2I^-

Vid slutet av titreringen har allt tiosulfat reagerat med joden, så det kommer inte att finnas fler S2O3^2-joner i lösningen. Detta innebär att eventuell ytterligare jod som tillsätts inte kommer att reagera med tiosulfatet och istället förblir i lösning som I2-molekyler. Dessa I2-molekyler kommer att absorbera ljus i det synliga spektrumet, vilket ger lösningen en blå färg.

Bildandet av trijodidjoner kan representeras av följande ekvation:

I2 + I- → I3^-

I3-jonerna är också ansvariga för lösningens blå färg.