1. Mall -DNA:
* Funktion: DNA -sekvensen du vill förstärka. Det fungerar som planen för polymerasenzymet att kopiera.
2. Primrar:
* Funktion: Korta, enkelsträngade DNA-sekvenser (vanligtvis 18-30 nukleotider) som är komplementära till specifika regioner på mall-DNA. De binder till mallen DNA och ger en utgångspunkt för DNA -polymeras.
3. DNA -polymeras:
* Funktion: Ett enzym som syntetiserar nya DNA -strängar med användning av mallen DNA och primrar. Det tillför nukleotider till 3' -änden av primern i en 5 'till 3' riktning.
4. Deoxynukleosidtrifosfater (DNTP):
* Funktion: Byggnadsblock av DNA. De består av fyra typer:DATP, DCTP, DGTP och DTTP, som representerar de fyra baserna (adenin, cytosin, guanin och tymin). DNA -polymeraset använder dessa för att montera de nya DNA -strängarna.
5. Buffertlösning:
* Funktion: Innehåller salter och joner som upprätthåller lämplig pH och jonstyrka för optimal DNA -polymerasaktivitet.
6. Magnesiumklorid (MGCL2):
* Funktion: En kofaktor för DNA -polymeras, som krävs för dess katalytiska aktivitet. Det hjälper också till att stabilisera DNA -strukturen.
7. Vatten:
* Funktion: Lösningsmedel för reaktionen och ger ett medium för komponenterna att interagera.
Här är en kort sammanfattning av PCR -processen:
1. Denaturation: Reaktionsblandningen upphettas till 94-98 ° C, vilket separerar det dubbelsträngade mall-DNA i enstaka trådar.
2. Annealing: Temperaturen sänks till 50-65 ° C, vilket gör att primrarna kan binda till sina komplementära sekvenser på det enkelsträngade mall-DNA.
3. Förlängning: Temperaturen höjs till 72 ° C, den optimala temperaturen för DNA -polymeraset. Polymeraset utvidgar primrarna och lägger till DNTP för att skapa nya DNA -strängar.
Dessa tre steg upprepas för flera cykler, vilket resulterar i exponentiell amplifiering av mål -DNA -sekvensen.
