TA-kloning är en enkel och bekväm metod för subkloning av polymeras kedjereaktion (PCR) -produkter. "TA" är kort för "tymin" och "adenin". Denna kloningsteknik utnyttjar tymins förmåga att hybridisera till adenin i närvaro av ligaser. Restriktionsenzymer används inte, till skillnad från den traditionella subkloningsmetoden. I stället förstärks PCR-produkter med hjälp av Taq-polymeras enzymer.

Metod

TA-kloningsmetoden använder terminaltransferasaktiviteten för vissa deoxyribonukleinsyraöverhängningar i varje ände av PCR-produkten.

En linjäriserad kloningsvektor med enstaka, tre prime-T (3'-T) överhäng som heter en T-vektor används för att klona denna PCR-produkt i en plasmidvektor. PCR-produkten blandas med denna vektor i hög proportion.

DNA-ligas (T4-ligas) sättes till blandningen, vilket gör det möjligt för de två produkterna att hybridisera och gå med.

Fördelar och nackdelar < TA-kloning är en lämplig metod för subkloning av PCR-produkter i den lineariserade vektorn, och det är mycket enklare och snabbare än traditionella subkloningsmetoder. Eftersom denna metod inte använder restriktionsenzymer kan produkter utan restriktionsenzymställen klonas.

En nackdel är att TA-kloningssatser är mycket dyra och därför är deras användning begränsad. Dessutom finns ingen riktningsklonning; så är sannolikheten för kloning i motsatt riktning större.

TA Kloningskit

Flera tillverkare säljer TA kloning kit. Vissa är Invitrogen, QIAGEN och Premier Biosoft.