historiskt , kloroform användes som en del av en fenol-kloroform extraktion metod. Så här fungerade det:
* celllys: Det första steget handlade om att bryta upp cellerna för att frigöra DNA.
* fenol: Fenol sattes sedan till blandningen. Fenol är en stark denaturant som skiljer proteiner från DNA.
* kloroform: Kloroform tillsattes för att skapa ett bifasiskt system , vilket betyder två lager bildade. Det översta skiktet innehöll den vattenhaltiga lösningen med DNA, medan det nedre skiktet innehöll fenolen och denaturerade proteinerna.
Varför kloroform inte längre används:
* Säkerhet: Kloroform är en toxisk och cancerframkallande förening, vilket utgör en betydande risk för forskare.
* Effektivitet: Moderna metoder som spinnkolonner eller magnetisk pärlbaserad extraktion är mycket snabbare, enklare och säkrare än fenol-kloroformmetoder. Dessa tekniker förlitar sig på olika principer för att isolera DNA.
I stället för kloroform använder modern DNA -extraktion:
* buffertar: Buffertar används för att skapa rätt pH och saltkoncentration för att lysa celler och separera DNA från andra cellulära komponenter.
* enzymer: Enzymer som proteinas K används för att smälta proteiner, vilket ytterligare separerar DNA från andra cellulära komponenter.
* spinnkolonner eller magnetiska pärlor: Dessa material binder till DNA, vilket möjliggör dess isolering och rening från resten av provet.
Sammanfattningsvis, medan kloroform en gång användes i DNA -extraktion, betraktas det inte längre som en säker eller effektiv metod. Moderna DNA -extraktionstekniker använder alternativa metoder för att uppnå samma resultat med större säkerhet och lätthet.
