Här är varför:
* RNA -utfällning: Etanol hjälper till att fälla ut RNA från lösningen. RNA är mycket lösligt i vatten, men när etanol tillsätts minskar det lösligheten för RNA, vilket gör att det kommer ut ur lösningen som en fast fällning.
* Tvättföroreningar: Under tvättsteget hjälper etanol att ta bort föroreningar som salter, proteiner och annat cellulärt skräp som kan vara närvarande i RNA -provet.
Hur det fungerar:
1. dehydrering: Etanol är ett dehydratiseringsmedel, vilket innebär att det tar bort vatten från lösningen. Denna minskning av vatteninnehållet sänker lösligheten för RNA, vilket leder till nederbörd.
2. Salteffekt: I de flesta RNA -extraktionsprotokoll tillsätts en saltlösning som natriumacetat före etanol. Detta salt hjälper till att neutralisera den negativa laddningen av RNA -molekylen, vilket gör det mindre lösligt i vatten och mer benägna att fälla ut.
3. Selektivitet: Medan etanol fälls ut RNA, fäller det inte ut DNA lika effektivt. Detta hjälper till att säkerställa att det slutliga RNA -provet är relativt fritt från DNA -kontaminering.
Viktiga överväganden:
* etanolkoncentration: Koncentrationen av etanol som används vid RNA -extraktion är avgörande. För lågkoncentration kanske inte är effektiv för att fälla ut RNA, medan för hög koncentration kan leda till utfällning av andra oönskade komponenter. 75% etanol används ofta eftersom det ger en optimal balans för nederbörd och tvätt.
* Temperatur: Etanolutfällning utförs vanligtvis vid låga temperaturer, ofta på is eller vid 4 ° C, för att minimera nedbrytning av RNA.
Sammantaget spelar 75% etanol en kritisk roll i RNA -extraktion genom att utfälla RNA från lösning och tvätta bort föroreningar, vilket säkerställer isoleringen av rent och intakt RNA.
