1. Specifika erkännandewebbplatser:
Begränsning av typ II känner igen och skär DNA vid palindromiska sekvenser - Sekvenser som läser samma bakåt och framåt på motsatta trådar. Denna specificitet möjliggör exakt skärning av DNA på specifika platser, avgörande för att infoga gener i vektorer.
2. Definierat klyvningsmönster:
De skär vanligtvis DNA vid specifika positioner Inom deras igenkänningssekvens, vilket resulterar i antingen:
* trubbiga slutar: Båda trådarna skärs rakt över och lämnar ett trubbigt slut.
* Sticky Ends: Enzymet skär strängarna ojämnt och skapar kompletterande enkelsträngade överhäng ("klibbiga ändar").
3. Förutsägbarhet:
De förutsägbara skärmönstren gör det möjligt för forskare att:
* Skär DNA på önskade platser för genisolering och införande.
* generera kompatibla ändar för att gå med i DNA -fragment från olika källor.
4. Tillgänglighet:
En enorm mängd av typ II -begränsningsenzymer har identifierats och karakteriserats, vilket erbjuder ett brett utbud av igenkänningssekvenser och klyvningsmönster, vilket ger flexibilitet för genkloningstrategier.
Hur typ II -begränsningsenzymer används i genkloning:
1. genisolering: Målgenen är isolerad från givarorganismen med användning av ett specifikt begränsningsenzym som skär på en plats inom genen.
2. vektorberedning: En lämplig vektor (t.ex. plasmid, fag) skärs med samma begränsningsenzym, vilket skapar kompatibla ändar.
3. ligering: Det isolerade genfragmentet och den lineariserade vektorn ligeras tillsammans med användning av DNA -ligas och förenar DNA -fragmenten vid deras klibbiga ändar.
4. Transformation: Den rekombinanta vektorn införs i en värdcell (t.ex. bakterier), där den replikerar och uttrycker den insatta genen.
Sammanfattningsvis: Begränsning av typ II är oumbärliga för genkloning på grund av deras:
* Specificitet: Exakt skärning vid specifika DNA -sekvenser.
* Förutsägbarhet: Konsekventa klyvningsmönster för förutsägbara resultat.
* Tillgänglighet: Ett brett spektrum av enzymer för olika tillämpningar.
De underlättar den kontrollerade manipulationen av DNA, vilket möjliggör införing och uttryck av främmande gener i nya värdar, vilket bildar grunden för modern bioteknik.
