Av Nitu Bansal | Uppdaterad 24 mars 2022

TA-kloning erbjuder en enkel, begränsningsfri metod för subkloning av PCR-produkter. Tekniken drar nytta av den komplementära parningen av tymin och adenin, vilket möjliggör direkt ligering utan behov av restriktionsenzymer. PCR-amplifiering utförs vanligtvis med Taq-polymeras, som lägger till ett enda 3'-adeninöverhäng till varje DNA-sträng.

Metod

I TA-kloning innehåller en linjäriserad vektor – känd som en T-vektor – enstaka 3′‑T överhäng. PCR-produkten, som bär 3′‑A överhäng, blandas med T-vektorn i ett högt molförhållande. T4 DNA-ligas tillsätts sedan till blandningen, vilket gör att de komplementära A-T-paren kan hybridiseras och förseglas, vilket resulterar i en rekombinant plasmid.

Fördelar och nackdelar

Fördelar:

• Snabbt och enkelt protokoll – inga restriktionsenzymer krävs.
• Perfekt för kloning av fragment som saknar lämpliga restriktionsställen.
• Hög ligeringseffektivitet vid användning av högkvalitativa T-vektorer.

Nackdelar:

• Kommersiella kit kan vara dyra och begränsar utbredd användning.
• Icke-riktad kloning ökar chansen för vändning av infogningsorienteringen.

TA Cloning Kits

Ledande tillverkare levererar färdiga TA-kloningssatser, inklusive Invitrogen, QIAGEN och Premier Biosoft. Dessa kit tillhandahåller förberedda T-vektorer och optimerade ligeringsreagenser för att effektivisera arbetsflödet.